一般微生物限度方法学验证.doc

一般微生物限度方法学验证.doc微生物限度检查方法学验证1、供试品:XXXXX胶囊(批号:XXXXXX)2、菌种:菌落计数用菌种:枯草芽孢杆菌[(B)63501]金黄色葡萄球菌[(B)26003]大肠埃希菌[(B)44102]白色念珠菌[(F)98001]控制菌检查用菌种:大肠埃希菌[(B)44102]金黄色葡萄球菌[(B)26003]3、培养基:营养肉汤培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、4-***伞形***葡糖苷培养基(MUG)。4、预试验按照中国药典2005年版微生物限度检查法中常规法及培养基稀释法检验,金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的回收率均小于70%,本品有抑菌作用。5、细菌、霉菌及酵母菌计数按照中国药典2005年版微生物限度检查法进行细菌、霉菌及酵母菌计数的方法学验证试验及菌落计数。:(1)接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤中,35~37℃培养18~24小时,%无菌***化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-5~10-7,使菌数约为50~100cfu/ml。(2)接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中,23~28℃培养24~48小时,%无菌***化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-5~10-7,使菌数约为50~100cfu/ml。,***化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,振摇,使呈1:10的供试品储备液。取1:10的供试品储备液10ml,500转/分离心5分钟,取出上清液,***化钠-蛋白胨缓冲液至10ml,即为供试液。:(1)菌液组分别取菌液1ml,采用平皿计数法,测定上述制备好的菌液中每毫升的活菌数,测定结果见表1。(2)供试品对照组取供试液1ml,采用薄膜过滤法,测定供试品本底的菌数,***化钠-蛋白胨缓冲液,每次100ml,冲洗三次,测定结果见表2。(3)试验组取供试液1ml,按供试品对照组同法操作,在第三次冲洗液中加入50~100cfu试验菌,置规定温度培养2~5天观察结果,测定结果见表3。(4)稀释剂对照组分别取500~1000cfu试验菌,按供试液的制备同法操作后,制备稀释剂对照液,测定菌数,测定结果见表4。、菌液组菌落计数(cfu)金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌大肠埃希菌12平均表2、供试品对照组菌落计数(cfu)试验次数细菌数霉菌、酵母菌数12平均12平均123表3、试验组菌落计数(cfu)金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌大肠埃希菌123表4、稀释剂对照组菌落计数(cfu)金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌大肠埃希菌123表5、试验组回收率测定结果回收率%金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌大肠埃希菌123表6、稀释剂对照组回收率测定结果回收率%金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌大肠埃希菌123经上述实验验证,本品有抑菌作用,因此,采用离心和薄膜过滤法联用即可进行本品的微生物限度检查。6、控制菌检查按照中国药典2005年版微生物限度检查法进行控制菌的方法学验证试验及检查。:接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤中,35~37℃培养18~24小