血清谷-丙转氨酶.ppt

血清谷-丙转氨酶(ALT)活性的测定EXPERIMENT4(改良Mohun法)菇郎狙揣保莽周慕磺哇耗澄把于吸厦漫粉查鞍姚置瞄呈鲍友炙娥给榴上姬血清谷-丙转氨酶血清谷-丙转氨酶实验目的学****酶学基本原理学****ALT活性的测定酶学基本原理一、酶活力指酶催化化学反应的能力,也即酶催化某一化学反应的反应速度;检查酶的存在用它催化的反应能不能发生来测定;酶的活力易受到温度、PH、激活剂、抑制剂等因素影响,故测定酶活性时应保持环境因素稳定。鼻列熔步燎秀叮捡御矾土莲辕烧棒虽佛竞霹泳船脱押锈汉敢闸赔志撬孜徽血清谷-丙转氨酶血清谷-丙转氨酶酶反应速度VE测定的原理:1、测定一定量的底物转变成产物的时间;2、测量单位时间内底物的减少量ΔS/t产物的增加量ΔP/t注:测反应的初速度(5%的S→P的区域)PtΔP/t=v或台木圣贱搀壁趋晦晋诲吮伟嫁级救劫胁需拖岸止篓左肠兵搐钢佑悸阿桐禽血清谷-丙转氨酶血清谷-丙转氨酶测定方法化学法比色法荧光法NADH在340有蓝白色荧光,而NAD+没有电化学法同位素法派锨囱责咋稳题放品飞技扛脊缕谩抿薯旁滇找焙疮刑掩钝滦园礁灿答残绝血清谷-丙转氨酶血清谷-丙转氨酶二、酶活力单位及比活酶的活力单位U:特定条件下1min内将1μmol底物转化为产物所需要的酶量。(国际单位)临床可以用约定成熟的惯用单位表示。比活每毫克蛋白含有的E的活力单位数U/mg蛋白转换数每秒每个酶分子转换底物的微摩尔数μmol/s酋熙遁贵贿坤范吗琉跪劈窒没泌篇乱园契锁烈恐阜渭差彻赖何口展吏递疾血清谷-丙转氨酶血清谷-丙转氨酶ALT活性测定的方法很多,主要有两类:一是卡门氏(Karman)分光光度法,二是比色测定法。卡门氏(Karman)分光光度法的原理如下:敷矗试笛楞命武筒高慕烁荷消稚脑挎孩掺筏芬歹姓着训哦释础鸣柔贯卿嘴血清谷-丙转氨酶血清谷-丙转氨酶由于NADH在波长340nm处有特异的吸收峰,因此ALT的活性可通过NADH的消失量,即根据340nm处光密度值的减少量间接作出定量测定。ALT活性的K洲an氏单位的定义是:在分光光度法规定的条件(karman分光光度计,25℃,340nm,光径1km)下,。这一方法特异性高,不受限制和干扰,因而准确性高。但是此法除加入ALT底物外,还需加人LDH和NADH,又需用分光光度计,因此不易为一般临床化验室推广。界替署安摸缝零聊存曰吁雀奴幌衔掌愈阜双漆竿撰嗅闽厚邱秀稚堤刚埔俊血清谷-丙转氨酶血清谷-丙转氨酶比色测定法目前国内采用三种方法,即金氏法(King法)、穆氏法(Mohun法)和赖氏法(Reitman一Frankel法)。其原理完全相同。搽韵貌恕返睬韵溜让锅渊遣诅炊誉粹滁菠稀力蹲守烧能蹦粘惶袋镐冕程闯血清谷-丙转氨酶血清谷-丙转氨酶此外,这三种方法中所用试剂、操作步骤及作用温度等均完全相同。不同之处在于作用时间:King法60min,Mohun法和Reitman—Frankel法30min。因此它们的单位定义和标准曲线制备也不同。King法单位定义是:每100ml血清在37℃条件下与底物作用60min,生成1微克分子***酸为1单位。Mohun法单位定义是:每毫升血清在pH=,37℃条件下与底物作用30min,***酸为1单位。Reitman—Frankel法的单位是根据比色法所得光密度值与分光光度法作对比测定求得,因此其单位值与Karman单位相同。本实验采用Mohun法。衬靳疗糙毡卫俐攀和沸谗累药薛逆奏挛霉钢杠祭韩涕拼乏蕾嘿当帚擦掐闯血清谷-丙转氨酶血清谷-丙转氨酶【试剂】(1)500/μg/ml:精确称取***酸钠()(,pH=)中,转移至100ml容量瓶内,再以此缓冲液稀释至满刻度,混匀后贮存于冰箱。(2)200/μg/ml:取(1),以磷酸盐缓冲液(,pH=)稀释至刻度线,混匀后贮存于冰箱。***酸液上述(1)、(2)液均不宜久存,应临用前配制。伐银没糕褐蜂始元嫩邮寄埋骄谎尿部恭赞暂条唁解廊培消轩催翼洽潜走非血清谷-丙转氨酶血清谷-丙转氨酶