实验五-影响酶活力的因素.doc

用正交法测定几种因素对酶活力的影响实验目的:1掌握正交法的原理2用正交法测定几种因素对于酶活力的影响实验原理:酶反应受到多种因素的影响,如底物浓度、酶浓度、温度、pH值、激活剂和抑制剂等都能影响酶的反应速度。这种多因素的实验可通过正交法即用—特制的表格——正交表来安排试验,计算和分析实验结果。这样就能通过少量实验取得较好的效果。实践证明正交法是一个多、好、快、省的方法,目前已广泛用于农业生产和科学实验中。本实验运用正交法测定酶浓度、温度、PH值这三个因素对酶活性的影响,并求得在什么样的底物浓度、温度和pH值时酶的活性最大。实验设计原理:实验器材:* 洗耳球X1漏斗X10恒温水浴锅X3紫外可见分光光度计X1烧杯实验所需药品:%血红蛋白液:,尿素36g,1mol/LNaOH溶液8ml,室温放置1h,使蛋白质变性。过滤除去不溶物,,。%三***醋酸溶液:15g三***醋酸溶于蒸馏水,并稀释至100ml。:3mg牛胰蛋白水解酶冷冻干粉,溶于10ml蒸馏水。-酚试剂A:溶液。。·5H2O溶于100ml1%酒石酸钾溶液。将前者50ml与硫酸铜-酒石酸钾溶液1ml混合。混合后的溶液一日内有效。-酚试剂B:将100g钨酸钠,25g钼酸钠,700ml蒸馏水,50ml85%磷酸及100ml浓盐酸至于1500ml磨口圆底烧瓶中,充分混匀后,接上磨口冷凝管,回流10h。再加入硫酸锂150g,蒸馏水50ml以及液溴数滴,开口煮沸15min,驱除过量的溴。冷却,稀释至1000ml,过滤,滤液呈现微绿色,储存于棕色瓶中。临用前,用标准氢氧化钠溶液滴定,用酚酞作为指示剂。根据滴定结果,将试剂稀释至相当于1mol/L的酸,储存于冰箱之中可以长期保存。实验步骤: **********.℃预温5min50℃预温5min60℃预温5min15%℃反应10min50℃反应10min60℃反应10min正交试验设计表按一般方法,如对三个因素三个水平的各种搭配都要考虑,共需做33=27此实验,(L是正交表的代号),L右下角的数字表示试验次数)。60L9表有两个特性:(1).每一列中“1”“2”“3”这三个数字都出现三次,即出现次数相同。(2)每两列的横行组成的“数对”共有九个,九种不同的数对(1,1)、(1,2)、(1,3)、(2,1)、(2,2)、(2,3)、(3,1)、(3,2)、(3、3)各出现一次。在每一列中各个不同的数字出现的次数相同;每两列的横行组成的各种不同的“数对”出现的次数也都相同,这两点就是正交表的特点,它保证了用正交表安排的试验计划的均衡搭