人硒蛋白P基因片段的克隆、原核表达纯化、抗体的制备及活性的初步研究.pdf

中国协和医科大学
硕士学位论文
人硒蛋白P基因片段的克隆、原核表达纯化、抗体的制备及活性
的初步研究
姓名:房青
申请学位级别:硕士
专业:细胞生物学
指导教师:林晨

人硒蛋白蚱蔚目寺⒃吮泶锎炕抗体的制各及活性的初步研究摘要硒是哺乳动物必需的一种微量元索,缺硒会导致多种病理状态。流行病学资料表明,补硒可以降低心衄管疾病和癌瘕的发病率,但是补硒过量可导硒在体内是以硒兹白的形式发挥硒特异的生理功能的。硒蛋臼中的硒以硒半胱氨教的形式存在。现在已经发现多种哺乳动物硒蛋白,硒豢白俏蛋白中较为特殊的一种。一般的硒蛋白仅含有一个硒半胱氨酸,而硒蛋白入硒鬣自辛礁鲅墙桓鑫:衛鑫腚桨彼岬娜ǔさ奈訮,另一个为仅含有一个硒半莸氨酸韵硒疆自慕隙萄切停锝隙痰奈按裀硒蛋裔中硒半虢***酸的合成藕掺入蛋自袋的梳索丛樱胍话惆被岵嗣,合残过程复杂,掺入效率低,故褥重缰表达旗蛋鑫暑乏获成功。硒蛋自含有多个硒半麟氨酸,其蓬缀表达更为邈难;铁斑浆中缝佬磺蛋舀街璺琰,牧率低,曩难以镰持爨自活一陡,数蔼至今硒蛋白蔡匦耘┕δ苋圆焕!我粕蓉先克隆了人硒蛋皇隙套ば投慊颍圃吮泶锵低炒罅勘泶蛋白顽幕娜宋鹤訮等,抗体的特异度和哭敏度较满意。此拭体可进中毒提供一个更为简便、灵敏和有效的指标奠定了基础。含有至少个硒半虢氨酸。含有霭被帷了人硒蛋岛危炕用庖呤埽诠隗来稳斓搅送们巳隧异嗟簆多克隆抗体,此撼体可检测人翳癞鳃腿系内源性合成的硒摄自⑴套罩刑烊晃一步应用于建立检测人硒殛自腅方法,为检测人体硒状况、监测硒致硒中毒。中匿协摹焦沂а妒垦Ю畚摘要
我们将人硒蛋白隙淘バ椭械奈腚装彼嵬槐湮0腚装彼岷笤谠吮达系统中获得了大量表达,纯化后研究其对线粒体膜透过性孑的作用。首次发现其有一个剂艇依赖性的促进线敉体7藕痛俳赴蛲龅淖用,并且可与三氧化二***协同发挥此作用。而将此重组蛋囱说霭被如何,有何稿床意义,与硒的预防肿瘤的作用有何关系,说霭蹦顾径萁活性中起什么作糯,都值得迸一步研究。勇矫我们在壳隆入硒爨自隙陶绲莈蛄惺狈⑾郑家蚴菅髦斜道的硒蛋螽嘈蛄杏辛绞屠圄伲咴诿兰5谝桓鑫腚桨彼岣揭S黾罨还蹋贾个氮鏊酸交纯。这种不阑楚否是一种鏊因多态性,在人群中分蠢麴侮,与疾病有铤关系,都藿得深入探讨。关键诞:硒、硒鬣自⑽敫嘲彼帷⒖谷膈旱按繮多竞隆撬钵、绥腿蠲亡酸去掉,剐完全没有促进7诺淖饔谩4酥刈榈鞍状俳鳳开放的机理中国协搁医科大学硕士学位论文撼要
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前言的作用。梢桓鎏厥獾拿苈胱印!N挥诳7哦谅肟内的特殊的蛋白质,其特征是蛋白中的硒以硒半胱氨酸琒迄今在动物中已发现余种硒蛋白,包括:止入赘孰墓趸硒蛋白中硒半胱氨酸的掺入有一整套与一般氨基酸不同的合成和掺入多等。这些成分的结构、位置和组成在原核生物和真核生物有较大的差异,因含量最高的硒蛋白,占血浆总硒的—%。硒蛋白谧橹泄惴悍植肌硒琒是哺乳动物体必需的微量元素之一。硒有多种生理功能,缺硒会导致多种病理状态,如:肝坏死、心肌病、心血管疾病的发病危险度增高、艾滋病人的死亡率增高等,流行病学调查表明,补硒可以降低硒是通过硒蛋白捶⒒悠渖砉δ艿摹N鞍资且焕的形式存在。蠖辔挥诘鞍椎幕钚灾行模缘鞍椎慕峁购凸δ芷鹬匾码子来编码谝话愕鞍字蔝作为终止密码子起作用诜氲耐辈羧到正在合成的多肽链中。故现在把醋魇亲槌傻鞍字实牡职被帷酶、滞训饷浮⒘蜓趸乖鞍谆乖傅群推渌δ芪粗5奈鞍祝缥肽链中的机制。除魑1嗦朊苈胱油猓剐枰N鞍譵械囊桓鎏厥的二级结构来指导在Σ羧隨,此稳定的茎环结构来被称为,及催化羧氲牡鞍字此在原核表达系统中还未能成功表达真核生物的硒蛋白。并且无论在动物体内还是不同的体外表达系统,羧胛鞍椎男识冀弦话惆被岬秃多。迄今为止,还未有成功地表达重组硒蛋白的报道。在结构上与别的硒蛋白不同,一般硒蛋白仅含一个鳶兄辽个人、小鼠、大鼠有个、牛有个、石斑鱼个H宋癌症的发病率。白⑽鞍譿、鞍椎取琒最初在血浆中被发现,是血浆中硒硒蛋白中国协和医科大学硕士学位论文前言
另外,硒蛋白卸喔鲎榘彼帷⒗蛋彼岬燃钚园被幔槌闪礁鲎榘彼峄为了能够研究这种在血浆中含硒量最多的硒蛋白,我们首先克隆了隙萄切偷膃蛄校迷藀表达系统中大量表达人硒蛋白因为原核硒蛋白和真核硒蛋白合成机制差异较大,我们将人硒蛋白白全长,编码霭被幔琹龆谅肟蚰赥,不可少的结构,可指导多个硒半胱氨酸掺入。一般硒蛋白仅有一个而有鯯,并且其指导羧胱饔檬撬形鞍字凶钋康摹集区,有结合肝素的特性并且可利用此区的特性进行蛋白纯化。械鯯,其中第一个挥贜端的第位,其余鑫挥贑端的。谘=刑烊淮嬖诹礁鲅切停恢治Hǔさ奈白恢治N鞍譖较短亚型,即在第鯯/Φ鞍缀铣商崆爸止。二种亚型的讼嗤琧