人类甲状腺癌高表达基因片段筛选与克隆.pdf

南华大学
硕士学位论文
人类甲状腺癌高表达基因片段筛选与克隆
姓名:王红卫
申请学位级别:硕士
专业:内分泌内科学
指导教师:文格波
20030501
人类甲状腺癌高表达基因片段筛选与克隆摘要丶省目的:构建人甲状腺癌组织消减文库并筛选在甲状腺癌高表达的相关基因,以方法:首先分别将甲状腺癌及癌旁组织分别提取癿缓笥τ靡种菩结果。本研究成功地构建了甲状腺癌组织特异表达的消减文库,此文库具绪论:构建的人甲状腺癌消减文库具有很高的消减效率;克隆的鰁内分泌专业研究生玉红卫指导教师探讨甲状腺癌发生发展的分子生物学机制。消减杂交技术构建人甲状腺癌消减文库。在进行抑制性消减杂交技术时,来自甲状腺癌的作为实验组,而来自癌旁组织的作为驱动方。文库构建后将其进行扩增,再进行蓝白筛选,提取质粒,并将其中的插入片段用法进行测序,然后进行生物信息学分析。有很高的消减效率。然后将此扩增的文库进行蓝白筛选。发现白色菌落所包含的质粒大多包含牟迦肫巍=洳迦肫谓胁庑颍玫搅个在甲状腺癌中高表达的片段,且发现其中一个片段有鱿嗤目奖础H缓蠼庑┢尉程序检索,进行同源性分析,结果表明这些片段与来自恶性肿瘤的相关基因片段具有很高的同源性。段与来自恶性肿瘤基因相关,提示他们所代表的基因可能在甲状腺癌的发生发展中起到某种重要的作用。消减杂交克隆文格波甲状腺癌筛选南华大学临床研究所硬士论文王红卫
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南华大学临床研究所硕士论文王红卫
消减杂交机制
翮对疾瘸楣关基因避行克隆、功能磷究来硬究疚病发生发鼹机制,开发疾病特异有效的渗断治疗方法成为当今医学、生物学研究的重大课题。对疾病特异蘩因表达的竟隆和功能鍪定不但其有理论价值,两且其有霆要变,发病机制以及发生发展的分子生物学基础尚未明确。遗传学研究表因或抑癌基因的突变或表达骅常,而研究对甲状腺癌特异渗断、治疗有帮韵豹平菰稼癌特异鏊因的搬道尚不多觅。蠢诧鸯霹速簿聱狡稼癌发,毛发本课题设计应用以抑制性消减杂交技术、寺〖际酢⑸锞傩息学技术等为我袭豹分子生物学鼓零,逶过巍隆平状豫癞与歪常季装稼组织之间的差异表达的基因,从中鉴定出一系列甲状腺瘸特异表达的基因,为阐明甲状腺癌相关基因的作用机制及甲状腺癌发生发展的分子生耪学鏊磕葵定了鼗妊懿基磷,舞今后开发甲狄豫癌特舅瞧渗凝、治疗方法提供理论指导。随着入类基因缝计划酶顺和完成和后基因组计划静全面藏开,邋过的艇床应用价值,嚣此成为医学分子生物学领域研究豹焦点。甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘸之一。它的生物学特性多鹾甲状腺癌是多基因稳关释瘙,霹能与挣癌藜因突变,蘸癌鏊因过夜达有关。目翦关于甲状腺癌的基因研究多集中子“’、劝┗展相关基因的克隧,功能研究,在临床及科磺领域都具有极其重要的意磊义。南华大学临珠讲究所硕论文红
实验材料甲状腺癌与正常甲状腺组织来源:常用试剂配置⑸约粒妇嘌甇作踔星谐男孪首橹瓯玖⒓匆旱@涠炒恚姹4姹赣谩0组织经病理检查证实为“甲状腺乳头状癌狪冢荒そ螅喝缤糽感受念大肠杆菌患者,男性,岁。右甲状腺肿块针吸细胞学检查显示为甲状腺癌。行右甲状腺全切手术。臼比“┳橹鞍┡宰橹整个过程都是无菌操癌旁组织经病理检查证实为正常甲状腺组织。来源约梁质粒载体为—氨苄青霉素上海生工公司产品限制性内切酶孀B济甇%胰蛋白胨名称试剂盒静公司产品约梁琼脂粉胰蛋白胨酵母提取物显色剂疘%酵母提取物示。
霹、主要仪器与耗材、/抗生素固体培养板:、碱裂解法质粒提取溶液、溶液的配制:,按疞浓瘦鸯瑟入琼￡鬟羚嚣裹压灭蘧露冉抵左右,按“痬呐ǘ燃尤氲\星嗝顾兀嘌澹淙,翻转平税,保存于。使用前,先在。跤蠹孵弯止腥热甔露祗轎鲈蕊新嘣狯剩娣跎滔淠谖。,,使髑兹小对内配制瓣马凝黢瑶像分耩仪鯠氯纯铺将上述成分溶予羲校,高压灭菌痠/。保存。溶液疞葡萄糖,/狢疞漆液:/溶液/、京市六一仪器厂~—汀⑵咸蜒繲公司臻海罴耀仪器有限公司上海跃进医疗器械厂按如下魄稠醚南疞.┰鲆荧光霉型、荚霉用—.,疞。南华大学临床错究所礁畚红弘
实验方法甲状腺癌与甲状腺癌旁组织总崛。单链铣的分离:八磂采用磁珠分离法分离,选用镜腜标本总奶崛。捍右渲薪ḿ鬃聪侔┳橹〕觯浦睾笱杆僦糜谠だ的研钵中,缓缓加入液氮,研磨至粉碎,按每组织/以裂解细胞膜,然后加入等体积酚/氯仿抽提蛋白,×胄模取上层液相,加入异丙醇以沉淀ヒ掖枷吹樱恋碛梦轗水┡宰橹躌提取方法同上,所用器具及试剂均经%处理渌约辆P驴7猓肨虴芫处理。具