抗消化系恶性肿瘤hTERT广谱疫苗的分子设计及体内实验初步研究.pdf

第三军医大学
博士学位论文
抗消化系恶性肿瘤hTERT广谱疫苗的分子设计及体内实验初步研
究
姓名:郭红
申请学位级别:博士
专业:内科学(消化系病)
指导教师:房殿春
20060501
单日期:业第三军医大学研究生学位论文独创性声明第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书论文作者签名:加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。秉承学校严谨的校风和科研作风,本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。
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抗消化系恶性肿瘤闫滓呙绲姆肿由杓及体内实验初步研究摘要抗原基因,联合应用人粒ゼ浯碳ひ蜃游W艏的综合治疗,并有可能发挥至关重要的作用。大量研究证明,利用肿瘤疫苗有效激活特异性细胞毒性馨拖赴,,是实现肿瘤主动免疫治疗合物”来实现,因此,为拓宽消化道瘤苗的治疗谱,选择高表达于多种消化道肿瘤的生存中发挥重要作用。谖赴⒋蟪Π⒏伟┲斜泶锫史直鹞%、.ァ子包装肽的进展,,用阳离子抗原肽将核酸疫苗缩聚为直径数十纳米的病毒样颗粒,本研究首先化学合成、纯化并鉴定双功能阳离子抗原肽畃,构建并鉴定消化道恶性肿瘤中胃癌、肝癌、大肠癌的发病率和死亡率一直占据着各类恶性肿瘤的前唬沉品ǖ牧菩в植痪∪艘猓饩龆酥琢鲆呙绫厝灰2斡胂乐琢的关键,由于灾琢龅拿庖呤侗鹗峭ü琢鱿赴砻娴摹癕琢隹乖母通用肿瘤抗原人端粒酶逆转录酶琱0标,是目前制备疫苗较为科学而合理的选择。研究表明,6肆C富钚缘闹饕O匏俪煞郑谖种琢黾绦至选⒃鲋澈%,并具有高度保守性,以其为靶标设计瘤苗,将具有更广泛的应用人群;即使出现免疫逃逸而使泶锵碌鳎吮浠旧砭推鸬揭种浦琢錾さ淖饔茫呵也灰子发自身免疫反应和免疫耐受。故选择0斜曛聘髁雒纾扇繁L匾斓匾种瓢┫胞生长而最大程度对正常细胞不产生明显的不良反应,极大地提高了肿瘤基因治疗的安全性。肽疫苗和呙缫蚓弑附细叩陌踩院褪涤眯裕晌V琢鲆呙缪Я煊蛑凶钗常用的治疗方案,但是二者均在抗原递呈动力学方面存在不同差异。本课题结合阳离琕对表位疫苗和核酸疫苗进行互补和综合,借助正负使其易于被抗原递呈细胞所捕获;并合理结合员砦灰煨坞膒与全长,狢菇╒第三军医大学博士学位论文‘
、;な笛橐约巴干涞缇档确椒ǚ治霾证实制备疫苗的最佳条件;同时ê兔庖咦榛ㄖな蹈靡呙缣逋舛哉婧讼赴转染效应、,采用细胞毒性杀伤实验、臀寰厶迨笛槠兰燮渌し⒌奶匾煨訡的细胞效应;预防性保护实验、治疗性保护实验评价该疫苗激发体内抗瘤免疫的有效性。和恼婧怂ū泶镏柿籇阻滞实验、恋硎笛椤实验和透射电镜分析最终确定了制备所需的最佳浓度和正负电荷比值分研究的结果显示,首先成功地合成纯化了阳离子包装肽和构建了编码瓹;;免疫转基因小鼠后证实可有效激发抵抗消化道恶性肿瘤胃癌、肝癌、结肠癌的匾煨訡反应;并可预防性保护小鼠致死性胃癌的挑战,也可有效治愈小鼠的致死性肿瘤,证实激发抗瘤免疫的有效性;同时,各组疫苗结果对比分析提示,中多肽抗