发酵工程 论文谷氨酸发酵论文发酵工程论文.pdf

饲料研究 FEED RESEARCH NO .10,2010 61 水生动物营养青鱼生长激素(bcGH )是由脑下垂体前叶分泌的一种单链非糖多肽激素, 含有5 个外显子和4 个内含子, 类似哺乳类GH的基因组结构,由211 个氨基酸组成, 相对分子质量约为23 ku,能促进鱼体生长发育、加速蛋白质的合成及促进脂类降解等。酵母是水产饵料中较为理想的蛋白源。国内外研究表明:酵母培养物可增加动物营养,提高饲料适口性;提高动物对粗蛋白、粗纤维、维生素和矿物质等各种营养成分及能量的消化、吸收和利用, 促进生长;调节动物体内微生态平衡,促进肠胃有益菌群的生长,抑制病菌,提高动物免疫力等作用。而且,酵母还是外源基因理想表达受体系统,表达蛋白可以正确折叠和糖基化,具有活性等特性。酵母胞内表达蛋白的分选和区域化,增加了表达蛋白的稳定性,减少表达产物对宿主菌的毒害作用。实验室已将 bcGH 基因整合到高效表达的毕氏酵母, 表达产物经 SDS-PAGE 和Elisa 分析,结果表明: 青鱼生长激素基因在酵母体内得到高效表达。试验利用构建好的青鱼生长激素基因工程酵母青鱼生长激素基因酵母工程菌发酵条件的研究谢帝芝 1,2 李静静 1 刘小青 2 刘 臻 2 张建设 2 鲁双庆 2 肖调义 1 1. 湖南农业大学动物科学技术学院 2. 长沙学院生物工程与环境科学系摘 要 为研究青鱼生长激素基因工程菌在豆粕中的发酵工艺,试验采用L 25 (5 6) 正交设计探讨温度、 pH、培养时间、豆粕质量浓度、接种量和诱导剂质量浓度等6 个因素对青鱼生长激素基因工程菌的生长和蛋白表达量的影响。结果表明:各因子对蛋白表达量的影响明显,它们的作用大小依次为发酵时间>pH> 接种量>发酵温度>诱导剂质量浓度>豆粕质量浓度,最优发酵组合条件为发酵时间96 h、pH 7、接种量5 %、发酵温度30 ℃、诱导剂质量浓度1 % 及豆粕质量浓度6 %。确立发酵工艺后进行10 L 发酵罐发酵, 亿CFU/mL, %。关键词 青鱼生长激素 毕赤酵母 正交试验 发酵条件菌(简称bcGH 工程菌)在豆粕中发酵,这不仅能高效表达bcGH,还能降低豆粕中胰蛋白酶抑制剂、植酸和大豆凝血素等抗营养因子。研究目的在于探讨适宜的发酵条件和稳定的发酵工艺, 为生产绿色、安全和高效的新型微生物渔用配合饲料奠定基础。 1 材料与方法 材料 菌种 表达质粒为 的bcGH 工程菌,由实验室构建并保存。 试剂酵母提取物、胰蛋白胨和琼脂购自 Oxoid 公司; 丙烯酰***和甲叉双丙烯酰***购自bio-rad 公司; TEMED 购自Aldrich 公司;氨苄青霉素和过硫酸铵购自Sigma 公司;抗生素G418 和酵母氮源(YNB) 购自Invitrogen 公司;考马斯亮蓝购自Fluka 公司; Protein Molecular Weight Marker 购于Fermentas 公司; 其他试剂均为国产分析纯。 培养基 MD 培养基 15 g/L 琼脂粉,高压灭菌20 min, g/L 酵母基本