国家重点基础研究发展计划.doc

国家重点基础研究发展计划(973计划)课题3任务书一研究内容寄生虫的致病性是寄生虫和宿主双方多种因素共同/相互作用的结果,仅寄生虫方面就有多种因素影响其致病性,其中有些分子在发挥致病性中起着举足轻重的作用,称之为毒力因子,是虫体对宿主致病的重要分子基础。本课题选择具有代表性的新孢子虫、环形泰勒虫和捻转血矛线虫为研究对象,通过分别对不同毒力虫株、不同传代代次虫株和不同诱导致弱虫株的比较研究,鉴定出三种重要寄生虫发挥致病作用的关键毒力因子,为新型疫苗及药物新靶点的筛选奠定基础。研究内容::(1)应用细胞生物学、基因组学和蛋白质组学技术,比较辐照致弱和正常幼虫的细胞生长变化与分子表达特征,拟定关键毒力因子。(2)应用RNAi技术,研究拟定毒力因子对幼虫发育及感染能力的影响。阐明捻转血矛线虫辐射致弱的分子基础。:(1)比较致弱高代次细胞系与强毒低代次细胞系内裂殖体基因转录或蛋白分子表达的差异,鉴定毒力差异分子。利用蛋白示踪技术和荧光定量PCR技术,观察毒力因子在虫体内的分布和表达特征。(2)构建特定基因的基因缺陷虫株和/或过表达虫株,比较各虫株在体内(外)毒力的差异,确认泰勒虫的毒力因子,阐明泰勒虫的致弱机制。、鉴定与功能:(1)应用基因组学、转录组学、蛋白组学及生物信息学等技术,对新孢子虫不同毒力分离株间的相关分子进行比较和分析,筛选出候选毒力因子;在细胞水平上确认各分子的亚细胞定位和分布特征。(2)利用基因敲除和基因转染技术,构建特定基因敲除株、补足株或过表达虫株,在体外比较观察各虫株在黏附和侵入细胞、发育和繁殖中表型的变化,初步确定新孢子虫的毒力因子。将各虫株感染小鼠,比较小鼠感染后的临床表现、死亡率及体内荷虫量,确认各毒力因子在虫体发挥致病性中的重要作用。创新点和特色:运用寄生虫学、分子生物学和生物信息学等技术手段,开展捻转血矛线虫、泰勒虫和新孢子虫等影响寄生虫毒力的分子基础研究,发掘并确证与寄生虫毒力相关的新基因,研究不但可从理论上更深入的了解影响寄生虫毒力的分子基础,还可为阐明病原/宿主的免疫原性和耐受原性的机制提供有价值的资料。二、,阐明捻转血矛线虫辐射致弱虫株的分子机制。,阐明细胞传代致弱泰勒虫的分子机制。;阐明新孢子虫不同毒株间毒力差异的分子基础。~15篇,申请国家发明专利2~3项,培养学术带头人1~2名、学术骨干2~3名、博士及硕士研究生15~18名。三、研究方案及技术路线研究方案:、显微镜术以及流式细胞术等技术获得辐照和正常幼虫,并观察比较虫体/细胞凋亡坏死情况,提供辐照虫体/细胞表型特征资料。,生物信息学技术分析表达谱数据,提供捻转血矛线虫的幼虫基因表达特征谱的基础资料及候选毒力因子的信息。(ESP)差异,利用生物信息学技术分析蛋白表达谱数据,提供幼虫ESP表达特征谱的基础资料及候