大草履虫基因组DNA提取的最佳方法筛取.docx

大草履虫基因组DNA提取的最佳方法筛取.docx大草履虫基因组DNA提取的最佳方法筛取大草履虫(Parameciumcaudatum)是一种较为常见的原生动物,身体呈圆筒形,前端较圆,中后部较宽,后端较尖,外形很像一只倒放着的草鞋,,结构典型、繁殖快、观察方便、容易采集培养等特点,常被作为研究细胞遗传的好材料[1].目前,,遗传学家已经用它研究细胞质遗传、细胞质和细胞核在遗传中的相互作用,以及细胞类型的转变等,取得不少科学成果. 运用分子生物学技术,从DNA水平研究大草履虫,可以阐明种间亲缘关系和物种起源,,为草履虫亲缘关系研究、基因组比较、,除了对DNA的质量和数量有要求外,、CTABⅠ法和CTABⅡ法[2-4]对大草履虫进行基因组DNA的提取,从中筛选出合适的方法,并逐步完善,以便能够快速稳定地获得大草履虫的基因组DNA. 1材料与方法 实验室提供的大草履虫纯培养液,约950只/,置于2个10mL离心管中,5000r/,用无菌水离心洗涤2次,合并沉淀,作为试验材料. PHS-4CT型精密pH计、高压灭菌锅、TG16-WC型台式高速离心机、SHH-W21-4203用电热恒温水浴锅、微量移液器、紫外分光光度计(BECKMANCOULTER)、DYY-6C型电泳仪、Tamon1600凝胶成像系统等. DNAMarker、Tris碱、浓HCl、乙酸、CTAB、β-巯基乙醇、EDTA、SDS、琼脂糖、溴化乙锭(EB)、***仿、异戊醇、饱和酚、无水乙醇、冰醋酸、***化钠(NaCl)、醋酸钠(NaAc)等(试剂均为分析纯);SDS裂解液:150mmol/LNaCl、2%SDS、50mmol/LEDTA、20mmol/LTris-HCl、;CTABⅠ裂解液:100mmol/LTris-HCl、20mmol/LEDTA、、4%CTAB、%β-巯基乙醇(现配现用)、;CTABⅡ缓冲液:200mmol/LTris-HCl、50mmol/LEDTA、、2%β-巯基乙醇(现配现用)、;CTABⅡ裂解液:100mmol/LTris-HCl、50mmol/LEDTA、、3%CTAB、1%β-巯基乙醇(现配先用)、;TE缓冲液:10mmol/LTris-HCl、1mmol/LEDTA、;TAE电泳液:-HAc、、. (1)传统SDS法 (2)CTABⅠ法[3] ①Ⅰ裂解液,混匀,60℃水浴30~40min;    ②其余步骤同传统SDS法. (3)CTABⅡ法[4] ①向草履虫沉淀中加入冰浴的CTABⅡ,