肾康丸对糖尿病肾病足细胞及podocin蛋白的影响.pdf

南方医科大学硕士学位论文肾康丸对糖尿病肾病足细胞及podocin蛋白的影响姓名:张辉申请学位级别:硕士专业:中西医结合临床指导教师:魏连波 20070425 硕士学位论文肾康丸对糖尿病肾病足细胞及podocin蛋白的影响硕士研究生:张辉指导教师:魏连波教授摘要糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)常见的慢性微血管并发症之一,一旦发病病情则不可逆的慢性进展,最后发展为慢性肾衰竭终末期肾病(ESRD), 是DM患者的主要死亡原因之一。随着我国经济和社会的发展、生活和工作方式的改变,DM的发病率明显升高。据统计,2000年DM患者总量已达3100万人,%,而且患病率还在逐年增加。由于医疗条件的改善和国民医疗卫生意识的加强,DM患者的生存期大大延长,从而导致DM的慢性微血管并发症的发生率增高,DN的发病率也随之明显增高。因DN的发生加重了患者代谢紊乱,造成心脑血管等大血管并发症的发病率、致死率进一步增加。但因 DN发病机制复杂,机制作用靶点众多,而且许多机制尚不明确,到目前为止, 尚没有一种的治疗方法或药物可以完全有效的治疗DN,寻找一种安全、高效、低毒、低价的治疗药物或方法已经刻不容缓。明确的疾病发病机制是寻找有效治疗方法的基础,因此近年对DN的发病机制进行了大量深入的研究,并已经证实,肾小球足细胞及其相关分子的改变在 DN的发生和发展中起到关键性作用。研究发现1型、2型DN患者均出现足细胞相关蛋白表达下调,分布改变;足细胞凋亡、脱落、足细胞数目减少;足细胞形态的改变:足细胞肥大、足突融合、消失等病理变化,上述改变随DN的病情进展逐渐加重,通过纠正上述病理变化可以明显改善DN临床症状、延缓DN 的进展。足细胞相临足突之间的裂孔隔膜(SD)是构成肾小球滤过屏障的重要组成中文摘要部分,研究发现sD是由sD相关蛋白构成的蛋白复合体,对维持足细胞的形态具有重要的作用,同时还可以介导细胞外信号转导,从而激活一系列下游生物反应。Podocin是组成SD的重要功能蛋白之一,其缺失或功能异常可导致严重的蛋白尿、肾功能损伤及肾小球足突的广泛融合,提示podocin对维持肾脏的功能具有重要的作用。但目前有关podocin在DN中的改变以及作用机制的研究较少,而且部分研究的结果不统一,完全有必要对其进行深入的研究。由于DN缺乏有效的西医治疗药物,而中医治疗学的精髓“治病求本”,以及中药的多靶点治疗作用必然使其成为一种行之有效的治疗方法。但是祖国医学中并无DN的论述,目前大多数学者将其归属于“消渴”并发“水肿”。水病”“尿浊”“腰痛”“肾劳”“关格”等范畴,认为其病机为本虚标实,本虚是指脾肾气血、阴阳亏虚,标实是指瘀血、痰饮、水湿、浊毒等。病情常按照气虚或阴虚一气阴两虚一阴阳两虚规律动态发展,并兼夹瘀血、水湿、痰浊等标证, 尤其在病情早期和中期常见脾肾亏虚、气阴两伤、瘀血阻络的证候。肾康丸一方由黄芪、芡实、水蛭等组成。功效:益气健脾,滋阴补肾, DN见脾肾亏虚、气阴两伤、瘀血阻络的证候者。已作为珠江医院的医院制剂, 临床应用多年,疗效确切。该药可在一定程度上改善DN一般症状,保护肾脏, 延缓DN的进展。但其治疗DN的分子水平的作用机制还不清楚,有待进一步研究。因此,本研究假定在DN时出现p,xtocin的表达的异常,造成SD功能和结构、足细胞形态的改变,导致肾脏功能的损伤,在使用肾康丸治疗后可以通过纠正podocin表达的异常改变,改善或减轻SD和足细胞的损伤,保护肾脏功能, 延缓甚至阻断DN的进行性发展。实验通过建立DN动物模型,并使用肾康丸进行千预后,观察和检测相应指标以及podocin蛋白和mRNA的表达,探讨肾康丸治疗DN的分子作用机制,为其临床应用和推广提供实验依据,并进一步明确 DN的发生发展机制,寻找新的治疗靶点。具体如下: 实验一肾康丸对DN大鼠足细胞和肾脏的保护作用实验研究硕士擘位论文目的:观察肾康丸对DN大鼠模型足细胞和肾脏的保护作用,为药物的临床应用和进一步研究其作用机制提供实验依据。方法:首先以链脲佐菌素(STZ)按60mg·kg"1大鼠体重于禁食8h后一次性腹腔内注射法建立大鼠DM模型,4周后测定血糖,尿量和尿蛋白排泄率,以大鼠血糖>·,尿量>原尿量150%,尿蛋白排泄>30mg·kg-"1者为 DN成模,计算成模率。成模后模型大鼠随机分为4组:模型对照组、肾康丸组、安博维组、中西医结合组,另设正常对照组。灌胃给药每天1次治疗8周,治疗期间观察和测定大鼠一般状况、体重、血糖、尿糖、24h尿量、饮水量和24h 尿蛋白总量(Upro)等。末次给药后将大鼠入代谢笼中,收集24 h尿样测定尿糖、24 hUpro,记录饮水量。测定尾尖血糖、称量体重,然后用10%水合***醛腹腔麻醉大鼠,