氧化酶基因克隆及反义转化与枣遗传连锁图谱的加密研究.pdf

河北农业大学
博士学位论文
氧化酶基因克隆及反义转化与枣遗传连锁图谱的加密的
研究
姓名:齐靖
申请学位级别:博士
专业:果树学
指导教师:张玉星;申连英
20090610
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、梨和枣均是我国重要的经济树种,在我国栽培面积极广,是我国农业经济的重要组成部分。深化对这两种果树的分子生物学研究,并应用生物技术对其进行遗传改良,对于加速育种进程至关重要。在本研究中,围绕梨和枣分别开展了基因克隆、遗传转化、遗传图谱加密和治龅纫幌盗醒芯浚畈沽讼喙匮芯康目瞻祝⑽=后生物技术在果树育种中的进一步应用增添了新的理论依据。取得的主要成果如下所軦氧化酶保守序列设计一对引物,以鸭梨果实为模板扩增得到难祭鍭氧化酶基因片段,并以此序列为基础扩增该基因全长,得到了长度的的鸭梨趸富騟蛄校徊礁得到的序列开放性读码框设计引物得到鸭梨趸富駾序列,结果显示该基因有鐾庀宰雍个内含子组成,外显子和内含子的长度分别为匝祭鍭氧化酶基因所翻译的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果表明该氨基酸序列与其它种植物的趸父叨韧矗桓霭被岵谢的瓼超级家族保守结构域,且与异青霉素合酶及相关双脱氧酶的功能区域同源性较高,说明鸭梨趸赣κ粲超级家族的异青霉素合酶家族,该家族酶成员在发挥酶促作用时不需要以运竦玫难祭鍭氧化酶氨基酸序列进行二级结构和三级结构预测,结果发现该蛋白疏水性氨基酸位于分子内部,亲水性氨基酸位于分子表面,具有可溶性亲水蛋白的典型特征,不属于膜内在蛋白;但研究同时发现该蛋白具有龆罐Ⅴ;点,豆蔻酸可以通过与这些位点的甘氨酸残基相连接将鸭梨趸敢钥赡婀布连接的方式锚定在膜上,故推测鸭梨趸赣Ω檬蔷哂絮0罚佣罐ⅤC9辰构的脂锚定膜蛋白。直鹩肧咏缓蚇咏环治龌竦玫腁氧化酶基因在鸭梨基因组中的拷贝数及在不同组织中的表达情况,结果发现该基因仅在生殖器官中表达,且在基因组中以单拷贝形式存在,说明该基因主要参与系统型乙烯的内源合成,而系统鸵蚁┑暮铣墒怯捎敫没蛲葱越系偷牧硗釧氧化酶家族成员控制的。鸭梨上应至少存在两个趸富蚣易宄稍薄状喂菇搜祭鍭氧化酶基因的反义表达载体,并在农杆菌慕导下对鸭梨组培苗进行了遗传转化,经ㄖな倒灿株鸭梨组培苗中外源基因得到成功转化。杂交显示在这曜;蜓祭嬷谐株外源基因呈双拷贝外,其余曛型庠椿蚓缘タ奖葱问酱嬖凇杂跋霫┰龅囊蛩亟辛擞呕⒘嗽媸糁参镒钍蔍┰龇从μ逑担即反应液中包含摘要示:和作为辅因子。、··.
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酶、·引物和模板,从Φ淖钍释嘶鹞露任妗τ鮅锒株冬枣×临猗梨枣杂交代群体进行扩增,共获得标记个,其中个被成功加入到了已有的枣遗传连锁图谱中,使图谱总图距增加了.,标记间平均距离减少了⑻畈沽嗽计字个大于的标记空缺,使枣遗传连锁图谱的饱和度得到了进一步提高。冉狭嗽嬲氪坛ざ认喙匦宰窗ㄖ行母缮铣ふ氪坛ざ取⒅行母缮隙陶氪坛ざ取二次枝上长针刺长度和二次枝上短针刺长度谛鹿菇ǖ囊糯计缀驮计上的定位结果,发现仅有个坏阋恢拢な狄糯计椎谋ズ投仁怯跋ㄎ痪沸缘闹匾R蛩刂唬币餐撇庹鈒鯭位点可信度较高,与其紧密连锁的标记可为日后分子标记辅助育种提供指导。关键词:鸭梨;枣;趸福换蚩寺。簧镄畔⒀Х治觯环匆錜技术;遗传转化;遗传连锁图谱;治
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第一章鸭梨趸富蚩寺〖捌浞治果实成熟是指果实生长发育停止后发生的一系列生理生化变化的综合过程,是形成其典型的外观和食用品质的过程。对植物自身而言,果实成熟所伴随的衰老、软化有利于种子的传播,繁衍后代;但对于果品的生产和经营而言,衰老软化的果实将会给运输、贮藏、销售带来诸多不便并造成严重的经济损失。因此,探明果