绿茶茶多糖茶多酚对胰岛细胞的协同保护作用与研究.pdf

中国海洋大学硕士学位论文绿茶茶多糖与茶多酚对胰岛细胞的协同保护作用研究姓名:王林戈申请学位级别:硕士专业:水产品加工及贮藏工程指导教师:汪东风 201106 绿茶茶多糖与茶多酚对胰岛细胞的协同保护作用研究摘要近年来,随着社会发展和人们生活方式的改变,糖尿病发病率在全球范围内呈上升趋势,严重威胁人类健康。目前主要采用降血糖药物和注射胰岛素治疗,但会引发严重副作用且不能有效防治并发症,所以开发利用天然的抗糖尿病药物或保健品显得尤为必要。研究证实,粗老绿茶能显著防治糖尿病及其并发症, 其主要功效成分为茶多酚和茶多糖,但目前粗老茶的开发力度远远不够,加强对粗老茶资源的高值化开发利用己成为我国茶叶产业发展的必然趋势。如今,茶多酚已广泛应用于医药、化工和食品等行业,而有关茶多糖的研究正处于起步阶段。以往报道的多糖制备工艺存在诸多缺点,如有机溶剂消耗量大、污染环境、多糖活性受到影响等,所以探索安全有效的茶多糖分离纯化技术成为亟待解决的问题。此外,针对绿茶防治糖尿病的相关研究仅仅局限于在动物实验水平上单独研究茶多酚或茶多糖对糖尿病的治疗效果,而细胞实验水平及二者相互协同作用的研究鲜有文献报道。本文首先探讨了粗老绿茶中茶多酚和茶多糖的综合提取分离工艺;然后利用市售粗茶多糖为原料,将聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)、壳聚糖(CTS)树脂和层析技术等用于茶多糖的分离纯化,制备出具有高生理活性的相对纯品绿茶多糖(TPS)及其分级组分TPSl、TPS2,并对其进行结构分析;最后采用放射免疫法、、(SCGE)等方法,观察TPS 和EGCG对链脲佐菌素(STz)损伤M1N6细胞的协同保护作用,并初步探讨可能机制。结果如下: ,通过单因素和正交实验确定茶多酚和茶多糖的最佳热水浸提条件:料液比1:20、80℃、50min,两次,在此基础上通过有机溶剂综合萃取法制备粗茶多酚和茶多糖,%%。 ,首先确定最佳醇沉多糖条件为:乙醇浓度80%、沉淀3h、离心10 min,醇沉两次。进一步采用PVPP处理可达到脱除多糖制品中多酚和蛋白的双重目的,%%。最佳条件为:PVPP 、温度30℃、时间30 rain、处理两次:后续采用CTS树脂除杂得至iJTPS, FF分离得到分级组分TPSI和TPS2。 、气相色谱、氨基酸自动分析仪、紫外光谱及红外光谱等方法对TPS、TPSI和TPS2进行结构分析,发现:(1)三者都是含有蛋白质的酸性多糖糖缀合物。多糖部分主要由半乳糖、葡萄糖和阿拉伯糖组成,含有少量鼠李糖、甘露糖和木糖;而蛋白组分中含有常见的15~16种氨基酸,以天冬氨酸、谷氨酸、亮氨酸最多,肽链上含有丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸,而未检出羟赖氨酸和羟脯氨酸。(2)主要区别在于:,而 TPSl和TPS2分别为12KDa和10 KDa的相对均一多糖;。TPS、%、%%,%、%%,%、%%, 多酚类均未检出,TPS2中糖醛酸含量明显高于TPSI; ,表明:(1)TPS-500 pg/mL、EGCG-10 -50+EGCG—,tg/mL对受损 MIN6细胞分泌胰岛素功能的保护干预作用显著(P<), TPS-50+EGCG·();(2)TPS-50+EGCG— I,tg/mL组对胰岛细胞的保护作用优于茶水浸提物,说明茶多糖的分离纯化及TPS和EGCG 协同疗效的探索有一定的实际应用价值;(3)在葡萄糖刺激胰岛素分泌功能、线粒体膜电位(AlI,m)、ATP含量、, + gg/mL对STZ损伤MIN6细胞的保护修复作用都显著高于二者单独处理(尸<),充分体现了低剂量TPS和EGCG的协同疗效;(4) TPS+EGCG组对糖尿病的治疗作用与保护线粒体功能相关,可能是通过清除 ROS,保护DNA和线粒体功能,升高ATP水平等来减轻细胞的氧化应激损伤, ;(5)TPS中发挥保护胰岛细胞功能的主要成分是含有富含糖醛酸的酸性多糖TPS2,而非TPSI。本研究旨在通过一系列安全有效的分离纯化工艺制备出具有高天然活性的茶