芍药苷对黑素瘤a375增殖及nf-κb影响的研究.pdf

硕士学位论文

题目芍药苷对黑素瘤A375 增殖及NF-κB影响的研究
Effects on proliferation and NF-κB by PF
英文题目
in melanoma cell line A375

10820124
姓名张建青学号

李建军主任医师
所在学院医学院导师姓名

专业皮肤性病学
入学日期 2008年9月答辩日期 2011 年 4 月
学位论文原创性声明

本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中
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作者签名: 日期: 年月日
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作者签名: 导师签名:
日期: 年月日日期: 年月日
汕头大学医学院 2008 级硕士研究生学位论文

中文摘要

目的
探讨不同浓度芍药苷(paeoniflorin,PF)对人黑素瘤细胞株 A375 细胞增殖抑制率、
细胞凋亡率的影响以及对该细胞株 p16INK4a、p14INK/ARF、核因子-κB(NF-κB)亚基
p65 的 mRNA 水平的影响,为其临床应用及进一步深入研究提供基础。
方法
以 A375 细胞为研究对象,设定空白对照组及 5 个相应实验组,芍药苷含量分别为 0、
mg/ ml、 mg/ ml、 mg/ ml、 mg/ ml、 mg/ ml 培养液处理(芍药苷
纯度≥ 92%)。①倒置显微镜观察各组细胞密度及形态的变化;②MTT 比色法检测在干预
24、48 和 72 小时后各浓度药物对 A375 细胞的增殖抑制率的作用; ③Annexin V/ PI 试
剂盒染色后,采用流式细胞仪检测在干预 24 小时后各浓度药物对 A375 细胞的早期凋亡率
的影响;④SYBR Green- PCR 检测在干预 24、48 和 72 小时后各组 A375 细胞 p16INK4a、
p14INK/ARF、NF-κB 亚基 p65 的 mRNA 水平的影响。
结果
1、倒置显微镜观察显示芍药苷能抑制A375 细胞的生长,随着浓度的增大其密度减小,
细胞逐渐呈现短而粗的树枝状胞体,而不是正常的细长样核周体和双极树突样胞体。 2、
MTT 结果显示芍药苷能抑制 A375 细胞的增殖,且其抑制作用呈浓度依赖性,而无时间依赖
性。 3、Annexin V/PI染色法-流式细胞仪结果显示各组中 A375 细胞的早期凋亡率无显著
差异(P>)。 4、SYBR Green-PCR 结果显示:①芍药苷能促进 A375 细胞 p16INK4a
的 mRNA 转录水平,与对照组相比差异均有统计学意义(P<),且其促进作用呈浓度
依赖性,而无时间依赖性;②芍药苷能抑制 A375 细胞中 NF-κB 亚基 p65 的 mRNA 转录,
与对照组相比差异均有统计学意义(P<),且其抑制作用呈浓度依赖性,而无时间
依赖性;③芍药苷对 A375 细胞 p14INK/ARF 的 mRNA 水平无明显影响(P>)。
结论
1、芍药苷能抑制 A375 的增殖,且呈浓度依赖性而无时间依赖性;但其对 A375 细胞
凋亡无明显影响,可能与黑素瘤的诱导耐受性或肿瘤来源不同有关。2、芍药苷能促进 A375
p16INK4a 的表达,抑制 NF-κB 亚基 p65,且这种作用呈浓度依赖性而无时间依赖性;但
其对 p14INK/ARF 的转录无明显影响。由此推测,芍药苷对 A375 的增殖抑制作用可能通
I
汕头大学医学院 2008 级硕士研究生学位论文

过促进 p16INK4a,抑制 NF-κB 亚基 p65 表达而实现的。
关键词:
芍药苷;黑素瘤;增殖抑制率;p16INK4a;核因子-κB



























II
汕头大学医学院 2008 级硕