产气荚膜酸菌β、ε毒素不同片段的融合表达及免疫原性的研究.pdf

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指导教师躲多舟潭学位论文作者躲何竽沙//年沙月,口日』㈣尽骸骸骸骸褐譮臞簗『『『号鞋≯年彦月/学位论文版权使用授权书本人完全了解中国兽医药品监察所关于收集、保存、使用学位论本和电子版本;中监所有权保存学位论文的印刷本和电子版,并采用影印、缩印、扫描、数字化或其它手段保存论文;中监所有权提供目录检索以及提供本学位论文全文或者部分的阅览服务;中监所有权按有关规定向国家有关部门或者机构送交论文的复印件和电子版;在不用于学术活动。文的规定,同意如下各项内容:按照中监所要求提交学位论文的印刷以赢利为目的的前提下,中监所可以适当复制论文的部分或全部内容,
摘要定攻毒保护结果。结果表明:对投舅兀阬棚籶、¨.￡¨的、甑囊幻庋G寰素,￡萶、嗍、￡的一免血清中和效价分别为琹,,二免血清中和产气荚膜梭菌珻属梭状芽孢杆菌属,是~种重要的人兽共患病病原。该病的防控主要依赖于疫苗的免疫接种,现有的疫苗由全菌及类毒素灭活制备,存在注射剂量大、家畜接种局部反应较重等问题。鉴于以上原因,本试验试图融合表达毒素不同片段,并将表达产物免疫家兔,通过攻毒保护和血清中和试验比较其免疫原性,从而筛选出可提供足够免疫保护的毒素片段,以制备含有两种毒素保护性抗原的融合蛋白,为今后多价基因工程类毒素疫苗的研制奠定理论基础。为分析甓舅夭煌囟唐蔚拿庖咴裕ü鼶软件分析两毒素蛋白质的二级结构,根据亲水性基团的分布,截取毒素成熟肽序列上不同片段,通过┰、埘、辍7直鸾诤系鞍滓詌/只的剂量免疫家兔,首免后天以相同剂量加强免疫一次。分别测定首免后天,二免后旒彝醚G宓闹泻涂固效价,并于二免旌蠓直鹨詌牟阅に缶鶦型毒素,投舅亟泄ザ臼匝椋不能中和投舅鳎庋G逯兄挥蠨昝庖叨锟芍泻蚻虬腃型毒素,攻毒保护结果分别为.,,由此推测舅氐拿庖弑;ば砸览涤诙舅厝ǔさ耐暾浴6訢型毒效价分别为,,攻毒保护结果为、,,由此推测￡阬均可提供有效保护,而￡∞黯庖咴匀酰荒芴峁┯行П;ぃ砻鳌甓舅氐闹饕1;ば钥乖挥贜端的￡区域内。根据以上结果,构建了￡。诤匣虿⒒竦帽泶铩=ɑ竦玫摹埘籶融合蛋白以/只剂量免疫家兔,首免后天加强免疫一次,测定血清中和效价及免疫攻毒结果。结果表明:对投舅兀./只免疫组一免血清中和效价为庋G逯泻托Ъ为,攻毒保护结果为。对投舅兀幻庋G逯泻托Ъ畚,二免血清中和效价为攻毒保护结果为。结果表明,￡畃融合蛋白可对舅靥峁┳愎槐;ぃ浴甓舅夭荒鼙;ぃ庥￡.巧可对￡毒素提供保护的结果相矛盾。初步推测为毒素片段免疫原性的强弱主要依赖于其表位构象。当毒素表达蛋白越接近于其天然构象时,免疫原性越强,反之越弱。从￡.一健闕,￡片段的免疫原性于后者大为减低甚至丧多己推测当￡与片段较大的诤鲜保浔砦还瓜蠼洗笫艿絝舅赜跋欤拭庖咴员淙酢1冉细亍甑健蔚拿庖咴砸灿忻飨栽銮浚撇馐怯捎凇阬棚谓闲。云浔砦还瓜蟮囊种谱饔靡较小。这一推论有待相关实验进一步证实。关键词:产气荚膜梭菌;截短毒素;融合蛋白;
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