VEGF小干扰RNA抑制视网膜新生血管研究.pdf

天津医科大学
博士学位论文
VEGF小干扰RNA抑制视网膜新生血管的研究
姓名:刘爱华
申请学位级别:博士
专业:眼科学
指导教师:袁佳琴
20090501
中文摘要目的方法和早产儿视网膜病变等均会导致视网膜新生血管。血管内皮生长因子鼠氧诱导视网膜病变新生血管动物模型为研究对象,探讨小干扰价其治疗视网膜新生血管性疾病的效果。本研究包括糠郑粒载体,构建泶镏柿#;蟪Ω司盖小⒉庑蚣ā氧组中,脂质体榈挤直鹱H究赵靥逯柿空载体网膜病变小鼠随机分为缺氧对照组、空载体组和基因治疗组,正常组和缺氧对照组小鼠不做处理,榈疾A迩荒谧⑸淇赵靥逯柿:蚔表视网膜新生血管性疾病,如糖尿病性视网膜病变,缺血性视网膜静脉阻塞鞘油ば律9苄纬勺钪饕5纳ひ蜃印抑制的表达,可以减少视网膜新生血管的形成。本文采用扇偶际酰从分子水平抑制的表达。研究的目的是构建谋泶镏柿#孕对小鼠视网膜新生血管模型中视网膜新生血管的抑制作用,评直鹕杓普攵院锖托∈蟮腣「扇臨,⒀9苣谄は赴殖沙Q踝楹投然苋毖踝椤H组蚔表达质粒转染组毖踝橹形醋H镜南赴H氧对照组。常氧组细胞不做转染,为正常组。采用ü鄄煜赴鲋常瑀检测的表达,检测蛋白的表达。牧嫉腟方法建立氧诱导小鼠视网膜病变模型,采用染色、—ü庠煊笆油て唐鄄焓油ば律9艿男翁浠瑀检测视网膜中的动态表达。瓹/小鼠分为四组。常规空气中饲养小鼠为正常组,氧诱导小鼠视空载体组和基因治疗组分别以脂质体达质粒。天津医科大学博士学位论文
结论关键词:扇牛皇油ば律9埽谎9苣谄は赴谎9苣谄どひ蜃樱ê铣傻腄序列退火后克隆到载体上,并做测序分析,经酶切和测序甅法细胞转染、で呦允綱质粒转染组细胞对照组和空载体组中则可见到大量突破视网膜内界膜的内皮细胞细胞核,发生弱的表达,⑸銿表达质粒可有效鉴定确定为所需序列。的生长速度较其他各组细胞生长速度减慢。—蚖显示细胞及蛋白水平:正常组细胞仅见弱的和蛋白表达,,和蛋白抑制率分别为.%、.%。跤盏际油げ”湫∈笫油ば律9茉赑开始出现,锔叻澹后逐渐下降。氧诱导视网膜病变中在泶锝系停琍达高峰,以后逐渐下降。±砬衅允菊W楹苌偌酵黄剖油つ诮缒さ哪谄は赴赴耍率为ィ蛑瘟谱榻先毖醵哉兆楹涂赵靥遄槊飨约跎佟C庖哂ü馊旧允正常组呈弱阳性表达,对照组和空载体组表达呈强阳性,基因治疗组表达明显减少。,抑制率为.%。逋馐笛椋褐侍褰榈糣表达质粒能有效抑制猴视网膜微血管内皮细胞的生长速度及和蛋白的表达。抑制小鼠缺血性视网膜病变模型新生血管的形成。基因治疗;天津医科大学博士学位论文孝士里当日刁弋
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符号说明缩略词英文全称中文全称血管内皮生长因子扇小干扰双链小发卡环异硫氰酸荧光素’一二氨基联苯胺阳离子脂质体低氧诱导因子盏汲聊春咸早产儿视网膜病变光动力疗法血小板源性生长因子表皮生长因子磷酸盐缓冲液苏木素一伊红胎牛血清互补脱氧核糖核酸氧诱导视网膜病变出生后第軦天津医科火学博士学位论文一删!—。!
姆日期:学位论文作者签名:窆鹳作者签名:垒鱼笙日期:凇!D杲饷芎笫视帽臼谌ㄊ椤不保密臣才。学位论文原创性声明学位论文版权使用授权书本人郑重声明:所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取日期:年得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外,论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文,并编入有关数据库。保密本论文属于朐谝陨戏娇蚰诖颉啊獭年导师签名:!年。日
研究现状、成果目前,大部分眼部新生血管性疾病最终可导致失明,如糖尿病视网膜病变,形成,可出现继发的眼部病变,如新生血管性青光眼、增殖性玻璃体视网膜病性地控制眼部新生血管的药物。⒅琢龌邓酪蜃等,而被认为是最重要的血管生长因子。近年生血管性疾病的药物,为新生血管性眼病的治疗开辟了新的方向。日舌年龄相关性黄斑变性,早产儿视网膜病变等等。这些疾病由于眼部新生血管的变,严重影响患者视力预后。现阶段针对眼部新生血管的传统治疗方法存在