防止RNA酶污染的措施.pdf.pdf

中国试剂网 防止 RNA 酶污染的措施在所有 RNA 实验中,最关键的因素是分离得到全长的 RNA 。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶( RNA 酶)的污染。由于 RNA 酶广泛存在而稳定,一般反应不需要辅助因子。因而 RNA 制剂中只要存在少量的 RNA 酶就会引起 RNA 在制备与分析过程中的降解,而所制备的 RNA 的纯度和完整性又可直接影响 RNA 分析的结果,所以 RNA 的制备与分析操作难度极大。在实验中,一方面要严格控制外源性 RNA 酶的污染;另一方面要最大限度地抑制内源性的 RNA 酶。 RNA 酶可耐受多种处理而不被灭活,如煮沸、高压灭菌等。外源性的 RNA 酶存在于操作人员的手汗、唾液等,也可存在于灰尘中。在其它分子生物学实验中使用的 RNA 酶也会造成污染。这些外源性的 RNA酶可污染器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。而各种组织和细胞中则含有大量内源性的 RNA 酶。一、防止 RNA 酶污染的措施 1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于 180 ℃的高温下干烤 6hr 或更长时间。 2. 塑料器皿可用 % DEPC 水浸泡或用***仿冲洗(注意:有机玻璃器具因可被***仿腐蚀,故不能使用)。 3. 有机玻璃的电泳槽等,可先用去污剂洗涤,双蒸水冲洗,乙醇干燥,再浸泡在 3% H2 O2 室温 10min ,然后用 % DEPC 水冲洗,晾干。 4. 配制的溶液应尽可能的用 % DEPC ,在 37 ℃处理 12h 以上。然后用高压灭菌除去残留的 DEPC 。不能高压灭菌的试剂,应当用 DEPC 处理过的无菌双蒸水配制,然后经 滤膜过滤除菌。 5. 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套,实验过程中手套要勤换。 6. 设置 RNA 操作专用实验室,所有器械等应为专用。二、常用的 RNA 酶抑制剂 1. 焦磷酸二乙酯( DEPC ): 是一种强烈但不彻底的 RNA 酶抑制剂。它通过和 RNA 酶的