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华中科技大学
硕士学位论文
GRP78在肿瘤中的表达及衣霉素对其诱导表达
姓名:马媛
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:沈关心
20090501
华中科技大学硕士学位论文

GRP78 在肿瘤中的表达以及衣霉素对其诱导表达
华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学教研室
硕士研究生: 马媛
导师: 沈关心教授
中文摘要
背景与目的
葡萄糖调节蛋白78(GRP78)是热休克蛋白70家族的成员之一,作为一种内质网中
的分子伴侣,GRP78在维持细胞内环境的稳态方面发挥了重要作用。近年来研究发现
GRP78在许多肿瘤中高表达,并与肿瘤的增殖,转移,耐药性有关,使GRP78与肿瘤
关系的研究成为一个热点。但目前国内外欠缺GRP78在胃癌组织及各种肿瘤细胞株中
表达状况的研究。本文旨在探讨GRP78在胃癌组织和肿瘤细胞株中的表达,以及衣霉
素诱导GRP78在黑色素瘤细胞株A375中表达,为进一步作为肿瘤靶点研究奠定基础
方法
Green I实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测12例胃癌组织
及正常胃组织中GRP78 mRNA的表达水平,免疫组化方法检测石蜡切片中GRP78的蛋
白表达水平,。
SYBR Green I real-time PCR 检测 GRP78 在肝细胞株 L02 和肿瘤细胞株
HepG2、7721、A373、RaJi、K562、 MCF-7、 AGS 和 HeLa 中 mRNA 的表达。采
用流式细胞术间接免疫荧光法检测 GRP78 蛋白在各个细胞株中胞膜和胞浆的分布。
4μg/m1 衣霉素处理 A375 细胞株(黑色素瘤细胞),分别在处理后 2h、
6h、12h 及 24h 收集细胞,DMSO 处理 A375 细胞作为对照。采用 real-time PCR 检测
GRP78 mRNA,采用流式细胞术免疫间接荧光法检测胞浆蛋白水平。
结果
(P<),免疫组化检测
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显示,胃癌组织中胞浆染色GRP78阳性细胞的比例明显高于正常胃组织,差异有统计
学意义(P<)。
、HepG2、Raji及K562细胞株中GRP78 mRNA的表达无显著差异,GRP78
mRNA在A375细胞株中表达量低于L02, GRP78 mRNA在7721、MCF-7、AGS 、HeLa
细胞株中表达量高于L02。在 L02和上述各肿瘤细胞株中,胞膜GRP78在MCF-7中有一
定的表达,其他细胞株不表达或少量表达。在所检测的细胞株中AGS的GRP78 mRNA
和胞浆蛋白表达水平最高。
4μg/m1 衣霉素作用 A375 细胞株 2h 时,可诱导 GRP78 mRNA 和蛋白表达,
12h 时,蛋白和 mRNA 表达水平达到高峰,24h 时,GRP78 mRNA 和蛋白水平都出现
下降。
结论
胃癌组织中GRP78高表达,主要位于细胞质,胃癌细胞株AGS中GRP78高表达,
主要位于细胞质。进一步研究证明N-糖基化抑制剂衣霉素能够诱导黑色素瘤细胞株
A375中GRP78的表达,且其表达水平具有一定的时间依赖性。

关键词:葡萄糖调节蛋白(GRP78) 胃癌肿瘤细胞株衣霉素诱导
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华中科技大学硕士学位论文

The expression of GRP78 in tumor and induced by tunicamycin
Department of Immunology, Tongji Medical College of
Huazhong University of Science and Technology
Master Candidate: Mayuan
Supervisor : Prof. Guanxin shen
Abstract
Background and objective
It has been well-documented that GRP78 is highly elevated in a variety of solid tumors,
and human cancer biopsies, associating with malignancy and metastasis. So that GRP78 as
a new target for cancer therap