呼吸道杯状细胞粘蛋白分泌调控研究-小鼠呼吸道杯状细胞粘蛋白分泌模型.pdf

华中科技大学博士学位论文呼吸道杯状细胞粘蛋白分泌调控研究-小鼠呼吸道杯状细胞粘蛋白分泌模型姓名:朱云翔申请学位级别:博士专业:耳鼻咽喉科学指导教师:龚树生;C。WilliamDavis20040501缩写词表猵华中科技大掌同济医掌院博士掌位论文狝,%·猘,猚,籦华中科技大掌同济医掌院博士掌位论文甕—.Ⅱ.——:粘液纤毛清除系统是呼吸系统防御机制重要的组成部分,胶状的粘液毯捕捉粘液也是许多呼吸道疾病的重要特征。粘液的独特的胶状基质是由粘蛋白多聚化犹腔嗔吹奶堑鞍祝饕S烧衬は孪倌诘恼骋合赴蜕掀つ诘谋聪赴分泌。相对于粘膜下腺内的粘液细胞,杯状细胞对形成疾病中的粘液高分泌状态更为重要,这主要足山于⒌ノ幻婊纳掀つ诒聪赴⒋嬗懈嗟恼车鞍住、,这些部位由于气流的限制容易被粘液栓塞并且不能通过咳嗽得到清除。最近的研究表明杯状细胞分泌粘蛋白受顶部质膜受体的有力调控,磷酸肌醇和二酯酰甘油,分别提高胞内浓度和活化蛋白激酶D壳癉实验室的工作集中在位于和蛋白激酶掠蔚哪芄灰鸢诜从Φ闹匾5鞍质。它们包括:.肌动蛋白,它形成皮层微丝,可能阻碍颗粒进行胞泌。豆蔻酰化的富含丙氨酸的蛋白激酶孜锏鞍谖戳姿峄笨擅6《鞍姿坑谥誓ぃ北坏鞍准っ窩磷酸化后脱离质膜并以一种未明的机制导致皮层微丝分解。,凝溶胶蛋白相关蛋白,可分解肌动蛋白纤丝。⒌鞍准っ竎的同工酶停騟,可能二者之一或两者均活化。朱云翔师:龚树生吸入空气中的微粒和病原微生物,然后通过纤毛的摆动清除。另一方面,过量的而成,粘蛋白以前被称作粘液糖蛋白,是一类具有极高分子量和众多受体可被駻駻激活,通过偶联而活化磷脂酶导教授甒华中科技大掌同济医掌院下一步计划采用转基因/基因敲除小鼠以准确地研究这些蛋白质的功能。气雾剂每天中蚱苣诘稳隝%籼煲淮沃馗—巍N砘入男∈笮≈苌掀つ诜⑸聪赴苌掀つ谠蛎挥校黄苣滴入男∈笤蛟谄苣诠鄄斓奖聪赴N颐峭ü嗔鞔悠狼幻娓药理活性物质并收集气道上皮分泌产物。我们还建立了可半定量检笳车鞍方法,分别足采用小麦芽凝集素的酶联凝集素分析和采用粘蛋白单体的多克隆抗的粘蛋白。但通过雾化吸入激发的小鼠需要灌流支气管和肺,这是一个庞大、复杂的树状结构,实验结果波动较大:而通过气管内激发的小鼠仅需要灌流气管,因而表现的更加稳定,粘蛋白的基线分泌可维持∈倍挥薪洗蟮牟ǘR蚨我们关注于小鼠气管模型。当我们研究榷ǖ睦嗨莆顰孕∈笃辣状细胞分泌粘蛋白的作用时,获得了类似于我们从人⒋;叻置诘倍,随后迅速下降,表现为耗竭状态。组织饔煤蠼咏ú勘聪赴氏滞芽帕8谋洹我们成功地建立了小鼠呼吸道杯状细胞粘蛋白分泌模型。∈罂寺。约敖蚯贸∈罂寺 N关键词:杯状细胞,粘蛋白,呼吸道,嘌呤受体,锬P常小鼠的气道本来没有杯状细胞。为了建立小鼠气道杯状细胞模型我们选择了变应原致敏的方法。简言之,用卵白蛋白碇旅粜∈螅缓蟾鐿体的酶联免疫吸附剂测定。两利椒ň愎幻舾屑觳饬街植煌旅舴绞叫∈蠓置气管杯状上皮细胞得到的结果。。馢华中科技大掌同济匮掌院..,华中科技大掌同济医掌院博士掌位论文,;;—琣.·瑆琣,’甌瓸,琹..瑃琻.,“.“,瑆,琧;甋,“,;甈辏琽琲/￡.,,:—.琲琲:,.琾,瑆畆珹·,,—.·,..,瑃琺,,,。正常人每天吸入大量的空气,粘液可捕捉空气中的微粒和病原体,然后通过不问断的纤毛运动清除。在病理状态下,如慢性阻塞性肺病道,从而使粘液纤毛清除功能和呼吸功能受损,。同样,粘液的过量分泌也是变应性鼻炎、鼻息肉、哮喘、肺囊性纤维化等疾病的突出表现【俊粘液的主要成分是粘蛋,粘蛋白由位于粘膜上皮的杯状细胞和位于粘膜下腺的粘液细胞分泌。这两种细胞统称为粘液分泌细胞,虽然目前对杯状细胞和粘液细胞是否实际上是同一种细胞的不同表现形式尚有争议【俊@飞希衬下腺曾经是研究的焦点,因为在病理切片中粘膜下腺增生可以很明显的注意到。年提出了一个简单的形态学测量方法以评估腺体增生程度床饬肯体组织区域占整个气道壁厚度的比例。运用这一方法很容易趋向于强调粘膜下腺而杯状细胞在粘蛋白产生中的作用,则在近年来得到更多重视。原因有:首先,等采用了新的评估方法以测定单位气道表面积所产生的粘液量,他们发现在恒河猴挠腥砉侵С诺拇笃滥诒聪赴诘恼车鞍椎量是粘膜下腺中粘液细胞内的粘蛋白的兑陨稀】。其次粘膜下腺主要分布在有软骨支撑的大气道,但细小的无软骨的气道是发病机制中最重要的场所。由于气流的限制,小气道更容易被粘液栓塞并且不容易通过咳