新基因Mipu1的表达模式及抗心肌细胞凋亡作用研究.pdf

中南大学
博士学位论文
新基因Mipu1的表达模式及抗心肌细胞凋亡作用研究
姓名:王桂良
申请学位级别:博士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:肖献忠
20090301
摘心肌缺血在临床上非常常见,如冠状动脉粥样硬化引起的冠脉阻塞,冠状动脉痉挛、体外循环下行开心直视手术引起的心肌缺血,以及心脏移植供体心的缺血等。,这些表达上调的基因是心肌内源性保护分子机制的重要组成部分。,并发挥保护作用。如抗氧化酶免受氧化损伤的作用;热休克蛋白家族成员、缺泶锷系鳎煞⒒有薷词芩鸬鞍住⒎乐沟鞍字示奂⒔到獗湫缘鞍准翱氧化等功能,增强心肌对损伤的抵抗力;缺血预适应可提高抗凋亡蛋白的表达,而减少促凋亡蛋白谋泶铮佣跚嵝募∪毖#俟嘧⒑蟮南赴蛲发生率;而生长因子,特别是血管内皮生长因子的表达增加,有助于其他如一氧化氮合酶、环氧合酶.⒅舅峤岷系鞍住⒀9芑钚猿﹄摹⑷┨腔乖本实验室袁灿博士采用生物信息学方法和疪际跸嘟岷希寺×艘个大鼠心肌短暂缺血一再灌注诱导表达上调的新基因锹己没蚨ㄎ挥诖笫笕旧錶,其全长由五个外显子和四个内含子组成。在心、脑表达较高,在其他组织表达较少,目放阅读框由个核苷酸组成,编码含霭被岬亩嚯牧础是一个基序。蒋磊等利用随机寡核苷酸文库筛选到了一个餐腄结合序列为结合位点的核心序列,发现鞍椎腃一末端的六个锌指为其与岷为了观察泶锬J胶涂赡艿男募”;すδ埽狙芯渴紫却炕舜笫细胞核,鞍自谀约靶募∽橹斜泶镒罡撸巍⒇和琛⑸觥⒐趋兰⒙殉要基因超氧化物歧化酶⒐趸饷、,可发挥清除活性氧,保护心肌ё刺宓鞍住缺血心肌组织中微血管的新生及侧枝循环的建立,以改善缺血心肌的血液供应;酶等,,并发挥保护作用。典型的篐:型锌指蛋白,荒┒擞幸桓鯧峁褂颍珻一末端有个:锌指’,证明该序列是奶匾煨訢结合位点,其中所足够与必需,并证明且桓鲎B家种埔蜃印吮泶锏鞍祝票噶送每故驧多克隆抗体,发现鞍锥ㄎ挥博士学位论文中文摘要
分别于和蛋白质水平检测了诙淘萑毖T俟嘧⑿募∽橹癏碳心肌细胞中的表达模式,发现谌毖#俟嘧⑿募∽橹泶镌黾樱锏高峰,持续到籑在刺激的细胞中表达亦显著增加,并呈时活性氧在心肌细胞的损伤中发挥重要作用。本研究进一步观察了匝趸谋泶锛安捎肦干扰技术抑制细胞中谋泶铮采用活性氧贾翲赴鹕耍捎昧魇较赴豕鄄煜赴蛲龇⑸剩的活性,而猂蛳灾俳鳫。所致的细胞凋亡,并升高氧化应激状态凋亡相关基因的表达而参与凋亡进程的调节。⒍云涞骺鼗平辛颂过表达使鞍椎幕”泶锖陀盏急泶锞档停捎肦种芃表达能增强其结合活性。璈碳ぶ螅現的表达升高,达使鞍椎幕”;采用荧光素酶报告基因检测发现在正常状态及刺激下,芄灰种艶基因启动子的转录活性,甊蚰艽俳鳩次之,脾、肺中未检测到。采用、和间与剂量依赖模式。心肌缺血/再灌注损伤、心肌梗塞等心脏疾病引起心肌细胞凋亡和坏死,而应激所致心肌细胞损伤的可能保护作用,采用蜃H驹黾親赴现泶锟上灾跎貶。K碌南赴蛲觯档脱趸ぷ刺翪下的活性。基于且缓俗B家蜃樱虼宋颐峭撇釳可能通过调控某些重要因启动子区的序列进行了分析,发现多个凋亡相关基因的启动子区含有的岷衔坏愕暮诵男蛄校又醒∪×个具有代表性的凋亡相关基因讨,获得了以下实验结果:璈碳ぶ螅珺的表达升高,使鞍椎幕”泶锖陀盏急泶锞撸徊捎糜ü馑孛副ǜ婊蚣觳夥⑾衷谡常状态及刺激下,芄灰种艬基因启动子的转录活性,甊蚰艽俳鳥基因启动子的转录活性;采用染色质免疫沉淀发现在正常状态及刺激下,苡隑基因的启动子区结合,基因启动子的转录活性;采用发现在正常状态及刺激下,苡博士学位论文中文摘要
钠舳忧岷希琀茉銮科浣岷匣钚浴经刺激之后,的表达升高,”泶锖陀盏急泶锞撸基因检测发现在正常状态及刺激下,、骨骼肌组织中有弱表达,在肺和脾组织中无表达;谌毖#俟嘧⒋鼠心肌组织及刺激的心肌细胞表达明显升高;芤种乒趸关键词募∪毖R辉俟嘧⑺鹕耍趸ぃ蛲觯珺,”泶锖陀盏急泶锞档停徊捎糜ü馑孛副ǜ转录活性,⑾衷谡常状态及刺激下,,鞍锥ㄎ挥诎耍谀院托脑嘧橹泶锝细撸诟巍⒇和琛所致的心肌细胞凋亡,其机制与其通过抑制促凋亡相关基因的表达,并促进凋亡抗相关基因谋泶镉泄亍博士学位论文中文摘要
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