蚯蚓与蠕虫共同蛋白组分及其抗原模拟表位研究.pdf

蚯蚓与蠕虫共同蛋白组分及其抗原模拟表位的研究中文摘要法,均以检测患者体内的特异性抗体为主,所用的抗原多为虫体反应,直接影响检测试剂的特异性和敏感性,给临床诊断和现子向亚单位、表位多肽过渡。鉴此设想,利用现代分子生物学和免疫学技术,从研究导致非特异性交叉反应现象的物质基础为着眼点,寻找其交叉反应的同源性抗原分子,也许可以探讨出一条墓餐鞍鬃榉旨捌涿庖呋钚裕菏笛榈诙糠帜庥每跪球吸虫免疫球蛋白狪、肺吸虫免疫球蛋白粢籌作为靶分子对噬菌体肽库分别进行互轮筛选,旨在探讨能否从肽库中筛选出蚯蚓和蠕虫的共同模拟表位。并对模拟表位进行蛄械叉反应的分子机制。免疫学诊断是寄生虫病尤其是蠕虫病的主要诊断方粗抗原。但由于蠕虫抗原组分复杂,相互之间存在着严重的交叉场应用带来了极大的困难。目前,人们已经认识到抗原的特异性主要由特定的表位来体现,因而抗原的研究也在由天然大分解决寄生蠕虫间交叉反应的新途径。本研究第一部分旨在分析参与日本血吸虫免疫球蛋白猣和猪囊尾蚴免疫球蛋白“狪、日本血测定和氨基酸序列的分析,以期阐明蠕虫病血清免疫学诊断中交方法球居爰纳涑娴墓餐鞍鬃榉值难芯浚河胹—华中群即笱靡窖г沂垦芯可弦德畚目的环毛蚓用、肺吸虫⑿ǔ鋐琣』椭砟椅豺幽
选取吸光度埃较高的克隆与不同寄生虫病患者血清,即成虫抗原⑿ǔ嬗壮婵乖和猪囊尾蚴囊液抗原反应。D獗砦坏纳秆。河/的抗蚯蚓血清免疫球蛋白幻副臧澹尤胧删目庥氚坏陌蟹子结合。将特异性的噬菌体洗脱扩增,作为下一轮亲和筛选的源球蛋白【、日本血吸虫病免疫球蛋白狪和猪囊尾蚴病组来斡肞、—和—各筛选、用—、—和来谓衛轮筛选组胹狪秆轮轮的洗脱液铺板,随机挑取个阳性噬斑转入大肠杆菌例日本血吸虫病患者血清、例健康者血清和跪进一步判断其免疫反应性。提取阳性噬菌体克隆⒉舛ê塑籈分析蚯蚓抗原⑷毡狙N娉沙婵乖⒎挝的蛋白组分:并将其蛋白组分分别与日本血吸虫病、肺吸虫病、猪囊尾蚴病、旋毛虫病患者血清和抗蚯蚓兔血清进行噬菌体肽库。然后将实验分为榻小0蟹肿游7挝娌∶庖免疫球蛋白组分别是用秆轮将狪蚉狪鹘衛轮筛选组次用—、蚑狪魃秆轮组肨狪秆轮组玊、—和一【鹘衛轮筛选虲组来斡肨狪和—各筛选。将每组最后一扩增进行单克隆化。用酶联免疫吸附试验觳馄淇乖浴例猪囊尾蚴病患者血清、例肺吸虫病患者血清和蚓兔血清反应。根据反应情况,用卡方检验方法进行统计学,酸序列,分析其氨基酸序列的同源性。结果甈和、和牡鞍鬃榉旨浯嬖硕士研究生毕业论文华中科技大学同济医学院
!.和、蚉。!瑿缬氨酸⒏拾彼、蛋氨酸⒗蛋彼、脯氨酸⑺堪彼、脯氨酸⒕ò彼、脯氨酸结论甈与、和浯嬖谧啪哂忻蠕虫间存在交叉反应的物质基础。邮删目庵谢竦昧具有免疫活性的抗原模拟表位。不同阳性克隆具有完全相同的核别的靶结构主要为构像决定簇,即抗原表位的特异性主要由抗原较多分子量相近的蛋白条带。乖肿恿吭范围内与、、和的交叉反应尤其明显。、和材苡胪每跪球狙G褰虾玫慕岷稀组阳性克隆与有很好的结合率:椤组和檠粜钥隆与有较好的免疫反应;椤组和檠粜钥寺《杂有较高的敏感性。阳性克隆中只有少数.、;、!:虲可与相结合。结果提示,每组的克隆均与最后一轮筛选所用的靶分子有较好的免疫反应性。榧淇ǚ郊煅榻果表明,:蚉:、:虲.、与奶匾煨缘牟钜煳尴!。和!。与奶匾煨缘牟钜煳尴灾裕虲;与奶匾煨的差异无显著性:其余交叉反应率大多亦无统计学差异。瓺测序结果表明,所有目的克隆的核苷酸序列都完全相同,故其具有同一氨基酸序列:依次为丝氨酸㈢影彼、丝氨酸疫活性的共同蛋白组分;、和牡鞍鬃榉旨湟存在分子量相近的蛋白条带,这是蚯蚓与多种寄生蠕虫问、不同苷酸序列和氨基酸序列,但其免疫活性却相差很大挥胱詈笠轮筛选所用的靶分子有较好的免疫反应=峁崾荆固逅决定簇的三维结构或氨基酸的折叠方式所决定。因此,在降低蠕华中科技大学同济医学院硕士研究生毕业论文椋珻组和著性;
华中科技大学同济医学院虫病的免疫学诊断交叉反应率的研究中,不仅要考虑抗原的纯度,关键词:蚯蚓,蠕虫,狿琖—,共同蛋白组分,噬菌体呈现技术,抗原模拟表位,蛄还需考虑抗原表位的空间构像的影响。这一结果为蠕虫病的血清学交叉反应的分子研究提供了一个新的思路。硕士研究生单业论文
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前言学诊断变得越来越困难,免疫学技术在诊断寄生虫瘸方面的应用日益广泛。免疫学检查目前以检测患者体内的特异性抗体为