注射用重组人促卵泡激素制造及检定暂行规程.docx

注射用重组人促卵泡激素制造及检定暂行规程
本品系由含有高效表达人促卵泡激素基因的中国仓鼠卵巢（ CHO）细胞，
经过细胞培养，分离和高度纯化后冻干制成。含有维持其稳定性作用的保护剂， 不含防腐剂和抗生素。适应症为①不排卵（包括多囊卵巢综合症［PCODJ且对枸 椽酸克罗米酚治疗无反应的妇女。②对丁进行超排卵期或辅助生育技术，如体外 受精一胚胎移植（IVF）、配子输卵管内移植（GIFT）和合子输卵管内移植（ZIFT） D的患者，本品可刺激多卵泡发育。
基本要求

按中国《药品生产质量管理规范》要求实施。

应符合现行《中华人民共和国药典》2005版二部或《中国生物制品主要原 辅材料质控标准》的要求。未纳入上述标准的化学试剂，应不低丁化学纯。

生产用水源水应符合饮用水标准，纯化水及注射用水应符合现行 《中华人民 共和国药典〉〉2005版二部标准。

直接用丁生产的金届或玻璃等器具，应经过严格活洗及去热原质处理或灭菌 处理。
制造


重组人促卵泡激素工程细胞系由带有人促卵泡激素 a和6链基因的重组质粒
共转染的CHO-K1细胞系。
、传代及保存
从原始细胞库的细胞传代，扩增后冻存丁液氮中，作为主细胞库；从主细胞 库传代，扩增后冻存丁液氮中，建立工作细胞库。每次传代不超过批准的代次。
细胞系冻存丁液氮中，检定合格后方可用丁生产。

应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。

细菌和真菌（附录XII A）、支原体（附录XII B）、病蠹检查（附录XII C）。

应用同工酶分析、生物化学、免疫学、细胞学和遗传学标记物等任一方法进 行鉴别，应为典型CHG田胞。

应不低丁原始细胞库细胞表达量。


从工作细胞库来源的细胞复苏后，丁无血活、无蛋白培养基中进行传代和扩 增，供转瓶或细胞培养罐接种用。

生产用培养液应不含血活、蛋白质。

细胞培养全过程应严格按照无菌操作，细胞培养时间根据细胞生长情况而 定。

收集的培养液经过超虑法进行浓缩，经多步色谱纯化后得到高纯度的重组人 促卵泡激素，即为重组人促卵泡激素原液。除菌过滤后保存丁适宜温度，并规定 其有效期。

。


原液加入适宜的稳定剂，并用缓冲液稀释。除菌过滤后即成半成品。

。


应符合“生物制品分批规程”规定。

应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。半成品应及时分装、冷冻，冻干 的全过程中，制品的温度应不高丁 30Co

75IU/ 瓶。

应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定


应为无色澄明液体

，供试品主峰保留时间应与对照品 一致。
，供试品主峰的保留时间应与对照 品致。
（至少每半年测定一次）
取本品，照附录1测定，肽图谱应与对照品一致。
N末端氨基酸序列（至少每一年测定一次）：将本品烷基化处理， 再经HPLC分离纯化得到、链后，通过Edman降解法测序，两条链N末端15 个氨基酸序列分别为： 链：A-P-D-V-Q-D-C-P-E-C-T-L-Q-E-N , 链： N-S-C-E-L-T-X-I-T-I-A-I-E-K-E，其中X代表未测出氨基酸，可能有修饰？。

等电点
取本品，照附录2测定，-，供试品主区带应 与对照品一致？。

取本品（ mg/ml） 50ul,加2非还原上样缓冲液50ul,混匀即得供试品 溶液；取上述供试品溶液10ul，加入190ul 1非还原上样缓冲液，混匀后100C 加热5分钟，放冷即得对照溶液（供试品溶液 5%）。依法（药典2005版三部， 附录IV C,考马斯亮蓝法），用非还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测，分离 %，供试品溶液和对照溶液各取 20ul;考马斯亮蓝染色，凝胶成像 仪扫描记录结果。供试品中解离业基条带显