注射用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子.doc

注射用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子 Zhusheyong Chongzu Ren Lixibao Jushixibao Cijiyinzi binant Human Granulocyte/Macrophage Colony-stimulating Factor for Injection 本品系由高效表达人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子( GM -CS F )基因的大肠杆菌,经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂,不含防腐剂和抗生素。 1 基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 2 制造 工程菌菌种 名称及来源重组人 GM - CSF 工程菌株系由带有人 GM - CSF 基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。 种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 菌种检定主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。 划种 LB 琼脂平板应呈典型大肠杆菌集落形态,无其他杂菌生长。 染色镜检应为典型的革兰阴性杆菌。 对抗生素的抗性应与原始菌种相符。 电镜检查(工作种子批可免做) 应为典型大肠杆菌形态,无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。 生化反应应符合大肠杆菌生物学性状。 重组人 GM - CSF 表达量在摇床中培养,应不低于原始菌种的表达量。 质粒检查该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。 目的基因核苷酸序列检查(工作种子批可免做) 目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。 原液 种子液制备将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基(可含适量抗生素)中培养,供发酵罐接种用。 发酵用培养基采用适宜的不含任何抗生素的培养基。 种子液接种及发酵培养 在灭菌培养基中接种适量种子液。 在适宜的温度下进行发酵,应根据经批准的发酵工艺进行,并确定相应的发酵条件, 如温度、 pH 值、溶氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查(附录ⅨG)。 发酵液处理用适宜的方法收集处理菌体。 初步纯化采用经批准的纯化工艺进行初步纯化,使其纯度达到规定的要求。 高度纯化经初步纯化后, 采用经批准的工艺进行高度纯化, 使其达到 项要求, 即为重组人 GM - CS F 原液。加入适宜稳定剂,除菌过滤后保存于适宜温度,并规定其有效期。 项进行。 半成品 配制与除菌 稀释液配制按经批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释。 稀释与除菌将检定合格加稳定剂的重组人 GM - CSF 原液用 项稀释液稀释至所需浓度。除菌过滤后即为半成品,保存于 2~8℃。 项进行。 成品 分批应符合“生物制品分批规程”规定。 分装及冻干应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。 规格应为经批准的规格。 包装应符合“生物制品包装规程”规定。 3 检定 原液检定 3.