siRNA抑制SGC7901细胞系肝素酶表达及抑制其侵袭转移研究.pdf

论文作者签名:综论文作者签名:坑指导教师签名:五盐隆日期:,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C内容除外圆捎糜坝。跤』蚱渌侄伪4媛畚模期:二￡二表示谢意。日
种芐细胞系肝素酶表达及抑制其侵袭转移的研究方法结果目的·中文论著摘要·经多体外实验筛选肝素酶靶向的高效肿樱⒁源艘种细胞系肝素酶的表达,并通过体外侵袭实验和动物实验,观察赴蹈素酶表达抑制后侵袭转移能力的变化。联合应用生物信息学技术与高效杓圃蚪衧分子设计,并通过体外转录与化学合成小干扰,经脂质体转染胃癌细胞系;结合琖印迹检测扇判剩煌ü逋馇窒笛橛动物实验分别评价肝素酶后胃癌细胞系的侵袭与腹膜转移能力变化。H九ǘ疞,作用小时,抑制率经半定量—检测已达ィ璕觳猓琑氏喽钥瞻锥哉沾%,∈盬未检测到鞍妆达,且缮嫘示哂凶H九ǘ纫览敌浴G窒笛榻峁允綡术干扰组与对照组之间差异均有统计学差异。.籔;:扇抛榍袭抑制率问笛榉直鹞ィ%,%,平均抑制率为%。榷≧赴旮鼓ぷR颇芰觳猓壕骨蛔⑸銼细胞与稳定的细胞株及其对照细胞株芎螅馄使鄄旄鼓こ闪銮榭觯组间转移瘤总重量作疭讲畈黄检验衡量细胞株的转移能力,每组宦闶蟆周后空白对照组与阴性对照组在转移瘤总重量上无统计学差异,实验组与阴性对照组间在转移瘤总重量有统计学差异。—琑猅
关键词结论⑿蛄形’觕覩’辶的肿涌商匾煨砸种赴礖的表达;⒌弊H九ǘ任疞,作用时间为小时,邢騭可产生较强的基因沉默效应;⑻逋庑懈嗡孛窻种聘嗡孛副泶锖罂梢种芐细胞系侵袭能力;⒏嗡孛肝榷≧细胞株在裸鼠体内腹膜转移能力下降。肝素酶;扇牛恢琢銮窒恢琢鲎R
疭·英文论著摘要·甒·..·.痵瑃士.—%甌—瑃瓼瓾,
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的狣咸烟侨┧崮谇忻敢桓嗡孛,职,通过裂解硫酸肝素糖论文一肝素酶靶向秆∮·论文·细胞系主要试剂侵袭转移是恶性肿瘤的重要生物学行为特征,降解细胞外基质黄基底膜是其关键步骤之一。作为体内唯一降解硫酸乙酰肝素蛋白多糖氨聚糖链狦到饬蛩嵋阴8嗡氐鞍拙厶苹涤蒃和构成的组织屏障;间接释放和活化与结合的多种生长因子、趋化因子和酶类生物大分子,产生促肿瘤血管形成与肿瘤细胞生长等效应“埘。恼1泶锝鱿抻谔盘和免疫器官,而在恶性肿瘤细胞中尤其在高侵袭力恶性肿瘤细胞中,室常高表达,如乳腺癌、胃癌、食管癌、直肠癌、膀胱癌、肝癌等恶性肿瘤。本研究旨在应用技术对胃癌细胞系蠬表达抑制,观察此时细胞侵袭力转移力的改变,从而评价胛赴┣窒R葡喙匦浴R虼耍≡高效肿邮歉檬笛樗忱械墓丶1窘锥喂ぷ髦饕Müτ蒙镄畔⒀技术联合体外细胞转染实验,进行高效邢秆∮敫扇判始觳狻胃癌细胞系芍泄娇拼笱Щ∫窖г夯蜃檠Ы萄惺姨峁N赴细胞系鹪从谧R屏馨徒幔哂泻芨叩那窒R魄蹦埽⒅な盗似銱的过表达。
主要仪器ヅQG琔具酶猼,,等琂嗡孛傅タ寺】固琁;摹笨寺≡靥,小量质粒快速提取试剂盒,北京其余均为国产分析纯试剂。咚倮胄幕珿缬疽/缬静六一,北京细胞培养箱,;实时定量咚俚臀吕胄幕琔实验系统—琔超净工作台,江苏倒置显微镜,。培养基、培养基琔琂扩增仪,;撼上裣低琔畹臀卤琂,;.:,;琂,:猂
,获取人类序列τ肁驹线杓乒ぞ://Ⅳ產甤/痬痵甴进行邢騭的设计。针对设计结果,根据原则嘲进行人工筛选。等针对两个基因设计了植煌膕,观察它们的对目的基因的干涉效率,通过分析归纳出高效杓频陌颂踉颍浚巧ィ—位上至少有鯝/蛄忻挥心诓恐馗葱蛄校簧衔狝;第簧衔狝;第位上为位上不能为疌;第位不能为7弦陨咸跫蕉嗾撸扇判试礁摺4送猓瑂靶向位点宜远离翻译起始密码子数十个碱基之后,并经治鋈啡蟬分子与虻奈ㄒ煌源性即高度特异性。将邢騭序列打乱作为阴性对照肿樱瑽工具比对,确保其与任何基因都无同源性。将筛选得到的邢騭与阴性对照匆辶葱蛄’端加上启动子序列作为体外转录模板,并由大连宝生物公司合成。按照得魇椋胁僮鳌细胞在含%