肝素酶siRNA对肝癌细胞生长抑制作用研究及抗人肝素酶单克隆抗体制备.pdf

中国人民解放军军事医学科学院
硕士学位论文
肝素酶siRNA对肝癌细胞生长抑制作用的研究及抗人肝素酶单克
隆抗体的制备
姓名:刘至玄
申请学位级别:硕士
专业:生化与分子生物学
指导教师:宫锋
20070510
年三月上一曰论文作者签字:盍蓠论文作者签字:封趸氩辍!暝隆灰蝗发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得芏主匡堂盘堂堕或其它本学位论文作者完全了解呈童堕鲎盘茎瞳有关保留、使用学位论文的规定。特授权呈奎垦生盘茎瞳可以将学位论文的全部或部分鲨:军事医学科学院研究生学位论文独创性声明签字日期:鲨军事医学科学院研究生学位论文版权使用授权书皇塑年—.二月—:曰秉承军事医学科学院严谨的学风和科研作风,本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行的研究工作和取得的研究成果,除了文中特别加以标注和致谢之处外,论文中不包含其他人已经教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意将本学位论文的复印件和磁盘送C苎宦畚脑诮饷芎笫视眯邮谌ㄊ签字日期:交国家有关部门和机构。指导教师签字
肝素酶愿伟┫赴ひ种谱饔玫难芯考翱谷烁嗡酶单克隆抗体的制备珏蠹醒型△墅旺堡塑塑生篮翅型拄厦敛堑塞厘菹厶赶耋睦皇立隆菹住曲劁圣肝素酶琀且恢諦一葡萄糖苷内切酶,特异性降解细胞外基质和血管基底膜中硫酸肝素蛋白多糖的降解,破坏组织和血管的完整性,释放结合于硫酸肝素上的、等生物活性分子,与肿瘤转移密切相关,近年来成为肿瘤诊断和治疗的重要研究本实验采用扇际跹芯扛嗡孛赣胫琢錾镅形5墓叵怠达的赴辍2捎昧魇较赴酢、,免疫组化等方法对细胞鉴定的结果表明,实验组肝癌细胞肝素酶基因和蛋白表达明显降低;将实验组和对照组细胞接种裸鼠皮下所获得的成肿瘤数据表明,实验组成瘤速酶呈强阳性,实验组呈弱阳性。实验结果验证了肝素酶在肿瘤生长过程中的重要作用,提示技术对肝素酶表达及成瘤性具有抑制效果,说明扇采用抗原优势表位的预测、合成肝素酶优势抗原多肽,用杂交瘤技术制备了能够稳定分泌抗人肝素酶单克隆抗体的杂交瘤细胞,采用组化方法进行鉴定抗体特性,结果显示所生产的单克隆抗体可以特异性识别人丶蔧:肝素酶;;肝癌;单克隆抗体中文摘要对象。通过肝素酶种聘伟┫赴鸋中肝素酶的表达,得到了肝素酶低表度明显减缓、瘤重下降;肿瘤组织的免疫组化结果显示,对照组肿瘤组织肝素技术用于临床肿瘤的治疗具有很大的潜力。和免疫肝素酶,能够反映组织内的肝素酶含量,可以用于对肿瘤组织细胞内肝素酶水平的分析。第
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引言壁塞醒§浴髅烁先鹫丈靠刂频猎舶噍Υ栽疼谈像箴セ守ㄍⅢ肿☆陆J硫酸肝素、肝素酶概述细胞外基质,和基底膜,亲柚怪琢隼┥⒂胱R频钠琳希饕S山峁沟鞍包括胶原蛋白、层粘蛋白等吞前本厶橇街殖煞止钩伞L前本厶堑闹饕3煞质橇蛩岣嗡氐鞍锥嗵琀,主要由一个核心蛋白和数个与之共价连接的线性硫酸肝素,嗔醋槌桑琀杉禾侨┧岷习肪厶亲槌傻闹馗吹ノ还钩伞A蛩岣嗡毓惴捍嬖谟诟髦窒赴砻妫哂兄要的生理功能。除了锚定细胞维持组织结构外,硫酸肝素链上还结合着大量具胧芴宓慕岷希鹘诳鼓C赣肽C钢的相互作用等。,,图,有生物活性的大分子,介导蛋白质之间的相互作用,。图嗡孛附到釮淖饔梦坏篐;;第
旺塞醒§堋髅送鹚苌靠刎寰碌┑陌嘁舜岳掏徼泛谰易”盘肝素酶基因分子生物学特征,包括个外显子和个内含子的开放阅读框架【分子量的蛋白前体。肝素酶前体经糖基化后分子量约为糖基化与否对于酶活性并无明显影响。研究认为活性肝素酶是被专一蛋白酶在的多肽非共价键连接形成异二聚体而成。肝素酶与肿瘤的发生与发展的关系肝素酶为单基因酶,主要分布于细胞内,存在于高尔基体和溶酶体,也有于胎盘、脾脏、血小板以及中性粒细胞、单核细胞、活化淋巴细胞内,而在非免疫组织中仅胎盘有肝素酶的表达。研究发现在结肠癌早期即有肝素酶基因表达,而在结肠腺瘤期未检测到肝素酶的表达;在人乳腺癌原位及受浸润的导管及小叶区可检测到肝素酶和蛋白质的表达,正常乳腺组织中无肝素酶的表达或表达很少。说明肝素酶与炎症、免疫反应和肿瘤的发生有不转移的细胞系中只有少量表达。高转移潜能的肿瘤细胞比低转移潜能的肿瘤细胞的肝素酶活性高叮ǜ嗡孛竎直鹱H胛拮R魄绷Φ氖罅馨土内,发现肺部瘤灶增加了丁=ǜ嗡孛竎既氩痪哂凶R魄绷Φ腅细胞,使其高表达肝素酶,接种于小鼠体内,导致转染组发生明显的肝人类肝素酶基因定位于,全长【ā8嗡孛富虬桓,编码霭被