实验三 培养基的配制及湿热灭菌，玻璃器皿的干热灭菌.ppt

实验三
培养基的配制及湿热灭菌;玻璃器皿的干热灭菌
一、实验目的
明确培养基的配制原理;通过对基础培养基的配制,掌握配制培养基的一般方法和步骤。
学习高压蒸汽灭菌的操作方法;学习干热灭菌的操作技术。
实验原理
培养基
据组成成分可分为::由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 :有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。:利用天然来源的有机物配制而成。
剧用途可分为:能满足各种微生物的营养需求加富培养基:加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质,使其快速生长,便于分离:加入某种物质抑制其他微生物生长,使目标微生物得到富集,便于分离:用来检测微生物的某些代谢特性。
从培养基的物理状态可分为 :不加凝固剂的液体状态培养基。 :在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。:—%凝固剂而成的半固体状培养基。
消毒:使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的方法。
灭菌:采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方法。
干热灭菌法:电热烘箱作为干热灭菌器
加压蒸汽灭菌法其步骤如下:,将包扎好的物品放入其中。,进行加热3. 排除高压锅内的冷空气,可将排气阀打开,待排出大气后关闭排气阀;或关闭排气阀,,待压力回复到0时再关闭排气阀。,此时灭菌器内的温度为1210C,维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时,应适当降低压力,延长时间。,切断电源,待压力降至零时,才能打开排气阀,然后打开灭菌器盖,取出物品。
间歇灭菌法: 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里,每天蒸煮1次,每次煮沸1h,连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间,将物品(指培养基)放在370C恒温条件下培养过夜,这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体,以便下次蒸煮时杀灭。
过滤除菌法: 不能用加热灭菌的液体物质(如维生素、血清),一般可用细菌过滤器进行除菌。
紫外线灭菌法: 一般30W灯管,9m3空间,,就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂,可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力,但穿透力弱,即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除,因此只适用于空气及表面杀菌。
化学药剂消毒灭菌: 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液,它们有的是杀菌剂,有的是抑菌剂。
三、实验材料
药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖;可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O等。
高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。
其它:天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、包装纸、防水纸、绳、棉花、标签等。
四、实验步骤
培养基的配制
分离培养微生物常用器皿的准备
培养基和玻璃器材的灭菌
(一)、培养基的配制方法和步骤
称量:按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。
溶化:在搪瓷杯中加入所需水量,玻棒搅匀,加热溶解。
调pH值:用 NaOH或HCl调pH,用pH试纸对照。
加琼脂溶化:加热过程中要不断搅拌,可适当补水。
分装:注意不要污染棉塞。
包扎成捆,挂上标签(必须用铅笔写),注明何种培养基。
灭菌备用:培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h,确定无菌生长,方可使用。