低氧诱导因子1诱导血红素加氧酶1过表达在大鼠肾移植缺血再灌注损伤中保护性作用研究.pdf

中英文名词对照肾微血管内皮细胞焦碳酸二乙脂低氧诱导因子血红素加氧醇血管内皮细胞生长因子内皮细胞生长因子促红细胞生成素逆转录嗑勖噶词椒从末端脱氧棱苷酸转移醇介导的生物素断端标记法二氯基联苯胺甲基噻唑基四唑琼流式细胞仪磷酸盐缓冲液氧化反应蔟葡萄糖转运蛋白辣根过氧化物酶内皮细胞异体淋巴细胞混合培养乙二胺四乙酸复且大学博士论文Ⅱ二
缺血再灌注损伤中的保护性作用研究低氧诱导因子盏佳:焖丶友趺过表达在大鼠肾移植肾微血管内皮细胞的原代培养及低温缺氧再复氧损伤细胞模型的建立R随着更多特异性免疫抑制药物应用于临床,一急性排斥反应发生率已经大大减低,但是移植物长期存活状况并无明显改善。非免疫因素因而更加受到人们重视,而缺血再灌注损伤抟墒瞧渲屑V匾5囊换贰后因急性肾小管坏死贾乱浦采龉δ苎映倩指矗院蟾嵩黾蛹毙耘懦夂吐砸浦参锸功的发生率。低氧诱导因子螅侵匾5难跻览敌院俗B家蜃樱脱跆件下能上调多个靶基因表达以减少缺氧性损伤。靶基因之一的血红素加氧酶欢喔鲅芯恐な的芄辉谛脑唷⒏卧嗪托〕。第一部分目的:在体外原代培养肾微血管内皮细胞:建立肾微血管内皮细胞低温缺氧再复氧损伤模型,在体外试验中模拟临床肾移植过程中的缺血再灌注损伤。方法:采用三步梯度筛网法获得肾血管球后以%型胶原酶。掷牖竦肾微血管内皮细胞。四氮唑盐比色试验检测细胞活性,通过免疫组化法检测抗原、间接免疫荧光法检测因子相关抗原及流式细胞技术检测抗原鉴定培养细胞。对数生长期细胞低温、缺氧、去血清条件下培养笾糜谡条件培养以建立低温缺氧再复氧损伤细胞模型。结果:四氮唑盐比色试验检测细胞活性生长曲线近似倒“毙巍乖庖组化阳性染色为细胞膜呈棕褐色,阳性率为.%。Ⅷ因子相关抗原间接荧光检测显示胞浆内呈亮绿色,证实为血管内皮细胞。流式细胞技术检测抗原测得阳性细胞比例为..ァI鑫⒀9苣谄は赴臀氯毖踉俑囱醮后大部分细胞变圆收缩,细胞间隙明显增宽。结论:应用这种方法体外成功培养出纯度较高的肾微血管内皮细胞,传代后内皮细胞性状稳定;建立了细胞低温缺氧再复氧损伤模型。复旦大学博士论文
关键词:肾微血管内皮细胞;低温缺氧再复氧损伤第二部分低氧诱导因子盏佳:焖丶友趺过表达在肾微血管内皮细胞低温缺氧再复氧损伤中的保护性作用研究在肾微血管内皮细胞低温缺氧再复氧损伤模型中探讨低氧诱导因子榷ū泶锒匝:⒀9苣谄は赴臀翲鹕酥械目沟蛲龊兔疫调节作用并初步探讨其机制。方法:┪颪预处理肾微血管内皮细胞,设对照、低温、、蛋白免疫印记的方法检测各组细胞虷的和蛋白的表达水平。通过附榈嫉膁笨谀┒吮昙欠、流式细胞技术和免疫印记检测活化表达等方法检测各组细胞凋亡发生情况。通过内皮细胞异体淋巴细胞混合培养法检测各组肾微血管内皮细胞刺激异体淋巴细胞增殖的能力;。结果:各组细胞均有表达且各组间无统计学差异。经低温损伤后鞍表达水平与对照组相比显著增高。与对照组比较,瓺组鞍住和蛋自显著增高.;.镠一暗鞍妆泶镌龈户.,.。与低温组比较,;.、。低温损伤造成活化表达显著增高,,籇组表达水平与对照组比较无统计学差异,.楸泶锵灾龈S氲温组比较,。与对照组..比较,低温组,ィ琍目的:.和一鞍而..一复旦大学博士论文.
蚇组±%,坏蛲鱿赴壤灾龈撸珼组..增高无统计学意义S際楸冉希,。与对照组比较,细胞经低温损伤后上清中.,⒋碳ひ焯辶馨拖赴鲋陈±蚆锨逯蠭±,骄有显著增高。一榇碳ち馨拖赴鲋陈±,癐,蛃一.,接氲臀组比较显著下调,与对照组比较无统计学差异。一榇碳ち馨拖赴鲋率..癐±.±。,:低氧诱导因子貉:焖丶友趺;抗凋亡;免疫保护第三部分低氧诱导因子盏佳:焖丶友趺过表达对大鼠肾移植缺血再灌注损伤的保护性作用研究本试验借助同基因大鼠肾移植模型,模拟临床缺血再灌注损伤病理变化;。并进一步评价的表达水平和大鼠肾移植鹕顺潭燃涞墓叵担致哿秸叩谋;ば宰饔眉盎啤方法:雄性笫唬~周龄