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松果体囊肿

　　摘 要：体外培养山羊及绵羊的松果体细胞，观察其增殖情况和功效状态的改变。结果显示：山羊、绵羊的松果体细胞体外形态及生长情况相同。细胞多呈圆形或多角形，细胞体积有增大趋势。采取MTT了法检测细胞生长状态，发觉细胞有显著的增殖现象，大约于11 d达成高峰，用免疫组织化学对培养细胞进行染色， 发觉5-HT阳性细胞数量随细胞的增殖而增加。表明山羊和绵羊松果体细胞在体外均增殖旺盛，并能保持体内的分泌功效。
　　关键词：松果体细胞培养；M9了；5-HT免疫组化
　　中图分类号：S827
　　文件标识码：A
　　文章编号：1007―784701―0087―04
　　松果体为哺乳动物的主要神经内分泌器官， 产生多个***类和肽类物质，其关键分泌物--褪黑 素对很多器官的功效含有主要的调整作用。 为了解松果体的生理价值，很多学者采取体外培 养技术研究其细胞形态和分泌功效．体外构建松 果体组织并植入动物体内成为现在研究的热点， 这些研究有利于深入了解松果体的活动特点，为 深入调整动物体内松果体细胞分泌的研究积累 材料。
　　哺乳动物松果体细胞培养早在20世纪70年 代国外就有报道，1977年Rowe首次观察了体外 培养大鼠松果体细胞的形态，1978年Budat成功 检测了培养的大鼠松果体细胞褪黑素合成和分泌 功效。本试验以山羊和绵羊作为研究对象，对其 松果体进行体外培养，观察在无其它原因干扰条 件下山羊和绵羊松果体细胞的形态改变、增殖过 程和功效状态的异同，为研究松果体细胞分泌特 点及改变动物繁殖现实状况提供依据。
　　l 材料和方法
　　关键试验试剂及仪器
　　DMEM培养液，M199培养液 ，犊牛血清，胰蛋白酶 ，双抗，MTr，DMSO，兔抗5-HT血清，SABC试剂盒，DAB显色 试剂盒，自动酶标仪，C02培养箱，倒置显微镜 。
　　1．2 松果体细胞的体外培养
　　按伊斯兰方法屠宰1岁龄健康莱芜黑山羊6 只、小尾寒羊5只，分别进行以下步骤：快速开颅取 出松果体，冷D-hank昌液冲洗；剪碎后，0．25％胶 原酶消化30min，含血清培养液中和，重复吹打， 离心；加完全培养液吹打混匀，按每mL 1xl04的 细胞密度分别接种于96孔培养板和24孔板，放人37℃、5％C02培养箱内培养。另外，本
　　试验中山羊采取DMEM培养液，绵羊采取M199 培养液。
　　1．3 MTT法检测细胞增殖
　　从培养第3d开始，隔日取96孔板内一组细 胞，每孔加入MTY 15 μL，继续培养4h后，每孔 加入DMSO 30 gL，吹打至沉淀完全溶解后，在 0D570。处测吸光度值并绘制曲线。
　　1．4 5－HT免疫组织化学方法 24孔板每组从第3d开始隔日取出细胞爬 片，PBS冲洗，冷95％乙醇固定10min；用正常羊 血清在室温下封闭30rain；加入兔抗5―HT血清 37℃孵育2h，然后4℃过夜，PBS冲洗3 rainx3；加入生物素标识的IgG，37℃ 30min， PBS冲洗3minx3；SABC复合物37℃下作用30 rain，PBS洗3 minx3；DAB镜下显色5～10Min； 苏木素复染，脱水，透明，封片观察。
　　2 结果
　　2．1 松果体细胞的形态观察
　　倒置显微镜观察体外培养的山羊、