第2章 细胞培养（08－08-22).ppt

第二章 细胞培养
动物细胞培养是动物细胞工程的一项基本技术,它是细胞融合、细胞拆合、细胞凋亡、染色体导入和基因转移等项研究的技术基础,同时体外培养细胞也是医学研究尤其是肿瘤学研究的极其重要的材料。
原代培养:由体内直接取出组织或细胞进行培养。
原代培养的最大优点是:组织细胞刚脱离机体,生物性状尚未发生较大变化,在一定程度上能够反映体内的状态。
最常用的原代培养方法有组织块培养和分散细胞培养。
继代培养(传代培养):将原代细胞分散后继续在培养基中进行培养。
传代代数
细胞的世代(增殖代数)
区分:
一、动物细胞原代培养的启动
三、培养动物细胞的同步化方法
二、动物细胞系的建立技术
讲授提纲
四、动物细胞的冷冻保存技术
一、动物细胞原代培养的启动
建立一个体外研究体系和实验平台——用于理论及应用研究(如育种等);
建立细胞系——用于功能产品的开发(如药物、材料等) 。
目的:
对动物细胞原代培养的关键主要集中在培养组织的选择、培养基的选择与优化、培养条件的优化、添加物(包括营养成分与生长因子等)的筛选,以及细胞的转化技术等几个方面。
(一)最适培养组织的筛选
要想成功地进行动物细胞培养,作为组织来源的动物个体,一定要健康无毒。
一般说来,作为组织来源的动物越年轻,其细胞相对就越幼稚,仍然保持有较强的分裂能力,细胞培养成功的可能性就越大。因此,动物的胚胎或幼体应是起始细胞培养的最佳材料,故选择细胞培养用组织的一般原则是尽可能选用胚胎组织或幼小个体的器官进行培养。
(二)最佳培养基的选择与优化
要想成功地进行动物细胞培养,除确定最佳组织来源外,首先必须确定细胞培养的最适营养液,主要包括培养基的成分、类型及所需补充的营养成分。
1. 基本培养基的选择
RPMI 1640 MEM DMEM M199
F-12 ACM L-15 GIM
DM TC-100 ……
常用的培养基: