PD运动并发症发病中NR1亚基及ERK通路研究.pdf

上海交通大学
博士学位论文
PD运动并发症发病中NR1亚基及ERK通路的研究
姓名:孔敏
申请学位级别:博士
专业:神经病学
指导教师:刘振国
20090401
运动并发症发病中腔癊通路的研究摘要帕金森病’琍是一种老年人常见的神经系统变性疾病,纹状体多巴胺含量显著性减少为其特征性的生化特征。目前左旋多巴仍然是是治疗的金标准,但长期使用左旋多巴会引起诸多运动并发症,异动症与症状波动就是常见的现象,至今还无法得到满意的解决,其机制尚不清楚。许多研究者认为外源性多巴药物易造成对纹状体棘状神经元上多巴胺受体异常的波动性刺激。多巴胺受体和谷氨酸受体共定位于纹状体棘状神经元上。波动性的多巴胺受体刺激可能引起棘状神经元信号转导通路的变化,进而影响谷氨酸受体的状态及突触传递效率。纹状体神经元上反应性改变导致了左旋多巴诱发的运动并发症的出现。是促离子型谷氨酸受体中的一种,其特性取决于受体的亚单位组成及磷酸化状态。受体拮抗剂可减轻左旋多巴诱发的运动并发症,这说明受体与运动并发症的发生相关。最近研究表明,左旋多巴长期刺激确实改变了的特性。因此,本课题首先对受体通道的基本亚单位奶匦越醒芯俊M保笮喟统芬┖螅动反应改变会逐渐缓和,但再次使用左旋多巴后这些运动反应现象又很快出现。短期使用左旋多巴则不会出现上述运动反应改变。这提示我们可通过比较的方法,观察急性与长期左旋多巴作用后撤药对大鼠行为学与匦愿谋涞挠跋欤云谔教炙侵涞墓叵怠4送猓壳捌惹需要寻找和研发新型的抗药物,以替代和弥补已有药物的缺陷和不
足。研究发现长期非生理性的多巴胺波动性刺激激活了纹状体棘状神经元内多种激酶,并导致谷氨酸受体磷酸化。故而,我们设想通过抑制蛋白激酶钚岳醇跚崾芴辶姿峄锏椒乐乖硕⒎⒅⒌哪康摹近年来以受体激活为起点,细胞内信号转导通路为主线,构成运动并发症研究的重点。细胞外信号调节激酶撬苛言せ畹牡鞍激酶家族中的一个,被认为是从细胞表面到细胞核信号转导的重要调制点。谏窬葜式榈嫉幕疃包括学忆、神经可塑性等蟹⒒幼胖匾W饔茫湓赑硕⒎⒅⒅械谋浠耙庖迳形明了。为此本研究拟在运动并发症大鼠模型上,观察返谋泶铮并引入诽匾煨缘囊种萍罰以探讨吩赑硕发症中的作用。本课题共分为五个部分:第一部分:左旋多巴诱发帕金森病运动并发症大鼠模型的建立和评价通过霍腔喟土⑻宥ㄏ蜃⑸渲罶笫笄澳阅诓嗍⑴两鹕∧型,然后左旋多巴甲酯腹腔注射治疗/苄丝肼,每天埽鄄煲斐2蛔灾髟硕那榭黾靶P形!>笮喟椭疗后,帕金森病大鼠出现了异常不自主运动,包括刻板动作和对侧旋转行为;帕金森病大鼠呈现剂峰旋转圈数逐渐增加、旋转反应时间逐渐缩短的趋势,与人类异动症、症状波动具有相似特征。受体拮抗剂一苎映ぷ笮喟退盏嫉腜笫笮J奔涞乃醵蹋⒓跚峒练逍转次数。上述研究表明,我们成功建立了帕金森病运动并发症大鼠模型,为进一步研究其机制奠定了基础。第二部分:帕金森病运动并发症中窍赴植技傲姿峄纯龅氖笛研究/.
采用蛋白印迹法检测纹状体区窍赴植技傲姿峄疦、的表达情况。大鼠损伤侧纹状体细胞膜上磷酸化的数量明显减少,而姿峄氖课显著变化;长期左旋多巴处理后使损伤侧纹状体细胞膜上、姿峄氖棵飨陨系鳎蝗欢鹕瞬辔谱体艿鞍资课捶⑸飨员浠I鲜鲅芯勘砻鞒て谧笮喟妥饔玫致窍赴植加肓姿峄刺鱿置飨愿谋洌劝彼嵝藕疟患せ盍耍左旋多巴诱发的运动并发症可能与奶匦愿谋溆泄亍第三部分:急性与长期左旋多巴作用后撤药对大鼠行为学及响的比较研究的表达情况。急性左旋多巴作用使大鼠损伤侧纹状体细胞膜上降低的蚇、磷酸化数量可轻度升高,但撤药后很快恢复,不能长时间维持,旋转反应时间与剂峰旋转次数亦没有发生改变;而长期左旋多巴作用不仅引起旋转反应时间的缩短、剂峰旋转次数明显升高,同时使损伤侧纹状体膜上的⒘姿峄、泶锩飨陨撸页芬﹍天后膜上的磷酸化、泶锪咳晕衷诟咚剑毙反应时间与剂峰旋转次数还维持在那种改变的趋势。上述研究表明长期左旋多巴作用后撤药引起的这种长期运动反应现象可能与匦缘某期改变有关。第四部分:蛋白激酶种萍粮纳婆两鹕≡硕⒎⒅⒌难芯通过霍嵌喟桶妨⑻宥ㄏ蜃⑸渲链笫笄澳阅诓嗍⑴两鹕动物模型。对模型成功的大鼠接受每日两次左旋多巴/加
水平。上述研究表明,运动并发症的发生可能与纹状体返募活有关,并且返募せ畈糠质荘所依赖的;抑锘坊钚/苄丝肼骨蛔⑸洌中臁T诘熳笮喟妥⑸淝埃组大鼠给予他莫昔芬或溶剂处理。评估旋转反应时间及剂峰旋转圈数;采用蛋白印迹法检测纹状体区蚇、泶锴榭觥结果显示种萍了N舴夷孀A俗笮喟退盏嫉腜笫笮J奔的缩短,减轻了剂峰旋转次数;此外,他莫昔芬能调节与运动并发症密切相关的难窍赴植迹沂筃、牧姿峄矫飨降低。研究表明长期左旋多巴作用激活了纹状体棘状神经元内丝氨酸激酶⒌贾鹿劝彼崾芴辶姿峄佣鱿至嗽硕⒎⒅ⅲ灰种扑堪酸激酶钚缘囊┪锟赡苁侵瘟婆两鹕≡硕⒎⒅⒌囊恢中方式。第五部分:细胞外信号调节激酶通