第二十二章 常用分子生物学技术的原理及其应用.doc

第二十二章常用分子生物学技术的原理及其应用一、授课章节及主要内容:第二十二章常用分子生物学技术的原理及其应用二、授课对象:临床医学、预防、法医(五年制)、临床医学(七年制)三、授课学时:本章共1节课时(每个课时为45分钟)。四、教学目的和要求讲授分子生物学常用技术的基本原理和主要用途,帮助学生理解分子生物学的基本理论和研究现状,深入认识疾病的发病机制以及了解新的诊断和治疗方法。五、重点与难点掌握核酸分子杂交和Southern印记的基本原理。掌握PCR的定义及PCR的工作原理。。六、教学方法及授课大致安排本章教学共1学时。教授与自学相结合,启发与讨论相结合。七、主要外文专业词汇activationdomain,ADbindingdomain,BDblottingcDNAlibrarycloneDNAblottingDNAchipDNAmicroarrayduchennemusculardystrophy,plementationassaygain-of-functionmutationgenechipgeneknock-argetinggenomicDNAlibraryimmunoblottinginsituhybridizationloss-of-functionmutationsnitrocellulose,NCNorthernblottingpolymerasechainreaction,PCRpositionalcandidategeneapproachespositionalcloningposition-independentcandidategeneapproachespreyortargetproteinproteinchipQuencher,QrealtimePCRreporter,RrescuereversetranscriptionPCR,RT-ransgenicanimaltwo-colorfluorescentprobehybridizationWesternblottingyeasttwo-hybrid-system 八、思考题 PCR 基因文库基因芯片 。 。 ? 九、教材与教具:人民卫生出版社《生物化学》第六版十、授课提纲(或基本内容)概述Introduction分子生物学理论研究的种种突破无一不与分子生物学技术的产生和发展息息相关,可以说两者是科学与技术相互促进的最好例证,即理论上的发现为新技术的产生提供思路,而新技术的产生又为证实原有理论和发展新的理论提供有力的工具。因此,了解分子生物学技术原理及其应用,对于加深理解现代分子生物学的基本理论和研究现状,深入认识疾病的发生和发展的机制,理解和应用不断出现的新的诊断和治疗方法极有帮助。基于此目的,本章概括介绍目前医学分子生物学中的一些常用技术。第一节分子杂交与印迹技术SectiononeMolecularHybridizationandTheTechniqueofBlotting一、分子杂交和印迹技术的原理(principleofSectiononeMolecularHybridizationandTheTechniqueofBlotting)分子杂交是利用DNA变性与复性这一基本性质来进行DNA或RNA定性或定量分析的一项技术。分子杂交技术的原理主要涉及分子杂交特性、印迹技术、探针技术几个方面,其中分子杂交的概念在第二章已有详细描述,这里仅介绍印迹和探针技术。(一)印迹技术1975年,EdwenSouthern提出了分子印迹(渍)的概念。即将琼脂糖电泳分离的DN***段在胶中变性使其成为单链,然后将一张***纤维素(nitrocellulose,NC)膜放在胶上,上面压上一定厚度的吸水纸巾,利用毛细作用使胶中的DN***段转移到NC膜上,使之成为固相化分子。将载有DNA单链分子的NC膜放在溶液(杂交液)中,溶液中具有互补序列的DNA或RNA单链分子就可以结合到存在于NC膜的DNA分子上。这一技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹,因此称之为“Blotting”,译为印迹技术。它的定义是将在凝胶中分离的生物大分子转移(印迹)或直接将其放在固定化介质上并加以检测分析的技术。目前这种技术已广泛用于DNA、RNA、蛋白质的检测。除了上述靠毛细作用将DNA转移至NC膜外,后来又发展了电转移印迹技术和真空吸引转移印迹,缩短了转移所需的时间。另外亦有一些新的转移膜改善了转移效率和样品承载能力。探针技术探针(probe)是指经过特殊标