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目录
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第一章基因克隆
1. 操作流程---------------------------------------------------- 1
2. 方法-------------------------------------------------------- 1
设计引物------------------------------------------- 1
PCR------------------------------------------------- 1
割胶回收目的片段------------------------------------ 2
连接------------------------------------------------ 3
感受态细胞制备及转化-------------------------------- 3
接菌------------------------------------------------ 4
阳性克隆鉴定---------------------------------------- 5
质粒抽提-------------------------------------------- 5
测序------------------------------------------------ 6
3. 基因克隆的编码---------------------------------------------- 6
第二章酵母双杂交筛选
1. 操作流程---------------------------------------------------- 7
2. 方法-------------------------------------------------------- 7
诱饵基因转化筛库宿主菌 Y190------------------------- 7
含 Bait 基因质粒的 Y190 保种------------------------- 8
Bait 基因的自激活检测------------------------------ 9
诱饵基因筛库--------------------------------------- 10
抽提酵母质粒--------------------------------------- 13
酵母质粒的扩增------------------------------------- 14
Prey 质粒与 Bait 质粒共转 Y190----------------------- 16
第三章细胞培养和转染
1. 细胞培养--------------------------------------------------- 17
2. 细胞转染--------------------------------------------------- 17
脂质体介导的贴壁细胞转染法------------------------- 17
磷酸钙介导的贴壁细胞转染法------------------------- 18
3. 相关试剂--------------------------------------------------- 19
第四章免疫共沉淀
1. 操作流程--------------------------------------------------- 20
2. 方法------------------------------------------------------- 20
收获细胞------------------------------------------- 20
Protein G beads 悬液的制备------------------------- 20
Preclear ------------------------------------------ 21
免疫共沉淀----------------------------------------- 21
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