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“小绿萼”梅离体快繁体系的建立
　　摘要：以梅花品种小绿萼1年生枝条为试验材料，研究了采样时间、初代培养基、基本培养基和激素组合等对带芽茎段离体繁殖的影响。结果表明：（1）最佳采样时间为4―6月;（2）最佳腋芽诱导培养基为1/2 MS+ mg/L 6-BA+05 mg/L KT+ mg/L NAA;（3）最佳增殖培养基QL+ mg/L 6-BA+ mg/L NAA，增殖系数为427;（4）无菌苗在200 mg/L IBA浸渍处理数秒后，移植到1/2 QL培养基中，生根率为80%。
　　关键词：梅花;离体快繁;茎段;培养基
　　中图分类号： +3 文献标志码： A
　　文章编号：1002-1302（2015）04-0062-03
　　收稿日期：2014-05-09
　　基金项目：国家自然科学基金（编号：31070624）;国家“863”计划（编号：2011AA100207）。
　　作者简介：杨丽青（1986―），女，山西朔州人，硕士，从事园林植物遗传育种研究。E-mail：******@。
　　通信作者：张俊卫，博士，副教授，从事园林植物遗传育种研究。E-mail：******@。
　　梅是原产中国的传统名花，有悠久的栽培历史和丰富的栽培品种，具有极高的观赏价值和经济价值。在生产上，梅花以扦插、嫁接等无性繁殖为主，虽然能保持品种的优良性状，但是繁殖系数小，周期长。利用组培快繁技术，不仅可在短期内快速大量繁殖基因型一致的优质苗木，而且可获得无病毒苗木，大大加快了育苗进程和提高了苗木质量。自
Harada等[1]开展梅茎段离体繁殖以来，国内外在梅的离体快繁上取得了较快的进展[2-5]，但目前仍存在建立快繁体系的梅花品种少，部分品种在快繁过程中出现顶芽坏死、叶片黄化等难题。小绿萼是武汉地区的梅花老品种，具有极高的观赏价值。本研究旨在分析茎段采集时间、启动和增殖培养基对小绿萼离体繁殖的影响，以期建立其快繁体系，为该品种的应用推广提供一定的基础。
　　1 材料与方法
　　 材料
　　供试材料采于武汉市磨山中国梅花研究中心，除8―9月份停止采样，分别在3―11月中旬采集梅花品种小绿萼（图1-A）1年生枝条，用冰盒带回实验室。
　　 方法
　　 外植体灭菌及初代培养 采集回来的枝条剪成1～2 cm长的具节茎段，每茎段1～2个腋芽。用洗洁精浸泡 10～20 min，流水冲洗30 min后在超净工作台上用75%乙醇浸润30 s，%HgCl2中消毒8～15 min，然后用无菌水冲洗
6～7次，无菌滤纸拭干后接种于初代培养基（1/2MS+ mg/L 6-BA+ mg/L NAA）;为分析不同初代培养基对腋芽诱导的影响，以4月中旬采集的小绿萼枝条为材料，灭菌后接种至2种不同初代培养基：1/2MS+ mg/L 6-BA+01 mg/L NAA和1/2MS+ mg/L 6-BA+ mg/L NAA+ mg/L KT。每处理20个外植体，重复3次，接种30 d后统计诱导率，污染率在接种后10～15 d内统计。
　　 腋芽增殖培养 将伸长到1～2 cm的腋芽切下， mg/L 6- mg/L NAA的3种基本培养基和添加不同浓度6-BA和NAA组合的QL培养基中，观察腋芽的增殖，每处理10个外植体，重复3次，记录植株高度，生长情况，接种5周后统计腋芽增殖情况。
　　 丛生长度对继代的影响 待腋芽增殖形成的丛生芽伸长到不同长度（、～1、1～2 cm）时，将其从基部切下，放入继代培养基（1/2MS+ mg/L 6-BA+ mg/L NAA+ mg/L KT）中观察其生长，每处理5个外植体，重复3次。
　　 生根与移栽 选择生长健壮，株高超过2 cm的试管苗在5种生根培养基中进行生根培养。移栽时先将生根苗连培养瓶一起置于温室内进行为期10 d的炼苗，在此期间逐渐松开并揭去培养瓶的盖子，而后将植株根系上的培养基洗净，移栽到含有泥炭 ∶ 蛭石=1 ∶ 1 （体积比）的塑料盆中。移栽后的第
1周塑料盆上覆盖塑料薄膜以保湿，1周后慢慢揭去。
　　 培养条件 培养室温度为（23±2） ℃，空气相对湿度为60%左右，光照度为1 500～2 000 lx，光照周期为14 h/d。
　　2 结果与分析
　　 采样时间对腋芽诱导率的影响
　　茎段接种1周后腋芽开始萌发，2周后腋芽开始伸长，叶片逐渐展开，叶色浓绿（