革兰阴性杆菌AmpC酶检测分析及质粒介导AmpC酶耐药基因研究.pdf

在职人员申请硕士学位诡河跨运钳六虿论文题目革兰阴性杆菌酶的检分析及质粒介导酶耐基因研究学院皆河北医科大学第四医院申请人姓名刘东梅专业临床检验诊断学导师姓名及职称单保恩教授研究起止日期年月月.
改鸵┗蜓芯革兰阴性杆菌酶的检测分析及质粒介导要目的:随着荒邗0防嗫股卦诹俅采系墓惴河τ茫效地控制了细菌感染性疾病对人类生命的威胁,但随之丽来医院内感染的细菌中,革兰阴性杆菌蟪ΠO>⒖死撞的细菌耐药机制主要有郑细菌产生邗0访膜通透性改变,使抗生素无法进入菌体发挥抗菌作用:位蛋白的改变,使抗生素无法与之结合或降低抗生素对靶位蛋白的亲和力,从而降低抗生素的抗菌作用:馀疟没透性或具有将其从菌体内泵出的机制,使菌体内抗生素量减内酰胺酶引起的耐药最为突出,以—,最具有临床意摘的细菌耐药情况明显地削弱了荒邗0防嗫股氐目咕用。由其耐药性引发的临床治疗失败以及医院感染的爆发流行已成为日益严重的医疗事件和公共卫生问题。当前,细菌耐药性问题已成为全球性问题,引起了广泛的关注。在引起菌属、肠杆菌属、沙雷氏菌属枷嗟贝笠弧2糠帧D壳肮,,灭活邗0防嗫股兀细菌外,由于细菌内膜降低对抗生索的通少而产生耐药。。革兰阴性杆菌不仅产生染色体介导的荒邗0酶,而且还产生质粒介导的荒邗0访浮9庖逊中文摘要猻
现数十种质粒介导的邗0访傅哪鸵┗蛐停螅、、、、邗0访傅哪鸵┗,以及质粒邗0访改鸵基因型分析研究。本研究旨在通过对我院和白求恩医院年隆月临床分离的至少对~种三代泌孢菌素耐药的革兰阴性杆菌产生的腿硇头治觯沂局荒邗0访秆粜缘母锢家跣愿司牧餍刑氐慵爸方法:┥⒎ḿ觳庀妇鸵┍硇吞氐恪采用改良三维试验方法检测硇汀<∕碇板,分钟后于平板中央贴一含锋咔傻闹狡,,距纸片边缘Ψ派渥创个长】、宽牟郏嗔诹讲刍ノV苯恰7直鹩诓勰诩粗提酶液/生理盐水、粗提酶液氯唑西林粗提酶液克拉维酸鲎馓崦粗提酶液周围长出细菌,抑菌环缺损。形成一指向矢状菌苔,即为产酶阳性。无矢状菌苔者为阴性。产酶阳性者,ザ兰尤胧币种剖匝槲Q粜裕锤镁鶤酰胺酶检测阳性;ザ兰尤胧币种剖匝槲Q粜裕锤镁觳庋粜裕篊或ザ兰尤氩荒芤种泼富钚抑、、、、一、...等型。国内对质粒介导的粒要质粒耐药基因型别。“冗蛭髁趾螅培养R中文摘要
酶试验阴性奔尤隒和币置甘匝槲Q粜裕说明该菌同时产生虯街置福坏蓖奔尤隒和币置甘匝槿晕R跣裕舯籈纫种疲蛭=。若酶不能被酶抑制剂、抑制,该菌可能为产非、,如耐抑制剂广谱酶等。以肺炎克雷伯氏蓠为粜远哉眨砸豕党Ω司酶阳性对照,以大肠埃希菌R跣远哉铡訟荒邗0访含同时产虯街置者粜灾暧眉盍呀夥ㄌ崛∠妇柿#鴞亍转化试验,再次提取转化子质粒粤街种柿W髂0澹杓对夯蛐、、铮蠵扩增,琼脂糖凝胶电泳初步鉴定,并取阳性扩增产物回收,测序。以大肠埃希菌R跣远哉眨约梁兴带的阳性模板为阳性对照。结果:苁株革兰阴性杆菌中:共有株产酶阳性,产酶率为ァF渲械ゴ坎鶤内酰胺酶株,阳性率为%;单纯产内酰胺酶和粜株.;晡7歉卟鶤浮⒔鹗裘%R虼斯布斐霾鶤邗0访菌株】⑾纸鹗裘秆粜灾辍株酶阳性菌株对常用抗生素呈觋多重耐药性。除对亚胺培南和头孢吡肟全部敏感外,对其它各类药物均呈现不同程度的耐药。对氨基青霉素耐药率为,%:第三代头孢菌素的耐药率为.,ィ话毙材夏鸵┞饰%;氨基中文摘要;
源于含耐药基因临床菌株的转化株也同时检测到了该耐药糖苷类为.%;氟喹诺酮类为.%。其耐药率明显高于非产酶株的耐药率,约为·。%环窝卓死撞.;阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌%罢持噬忱资暇%@丛从谔当瓯.%荷丈舜疵娣置谖.。主要来自老年病房%⒑粑诳.、烧伤科琹%R曰贾刂⒎窝;大面积烧伤%。柿邗0访妇甑淖;株保留了对头孢西丁、三代头孢菌素的耐药性,对四代头孢菌素及碳青酶烯类亚胺培南的敏感性与临床分离株相近。株荒邗0访秆粜缘母锢家跣愿司柿D鸵┗型结果为:闐,脱粜裕株粜裕捶⑾、粜灾辏种基因型均阴性。基因,更加有力地说明耐药基阁是存在于质粒上的。耐药基因分别检出于大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌及阴沟肠杆菌。訢一虯基因扩增产物经测序,:τ酶牧既匝榉椒ḿ觳飧锢家跣愿司牟酶表型,在实际工作中是切实可行的。,应引起高度重视。柿=榈糀邗0访傅南菌耐药率比较高,对头孢西丁及第一、二、三代头孢菌素均耐药。可供临床经验用药选择的只有嬲代头孢菌素如头孢毗