苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白在转基因烟草中表达研究.pdf

黑龙江八一农垦大学
硕士学位论文
苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白在转基因烟草中的表达研究
姓名:张香荣
申请学位级别:硕士
专业:作物栽培与耕作学
指导教师:贝丽霞;田颖川
20070401
中文摘要珺在对数生长中期分泌的一类新型杀虫毒蛋白。通过改造微生物来源的新型高毒力本实验利用中国科学院微生物研究所改造的基因构建植物表达载体,导的方法进行烟草遗传转化,通过抗性筛选、再生芽伸长、生根等组织培养。获得嗫每剐杂交检测,结果显示转基因植株与阳性对照一样有特异性条带,而非转基因对照植株没有这条特带的有无可以证明蛞丫;窖滩莼蜃镈上。因烟草叶片后,;虻亩哉罩仓甓孕蔽埔蛾则不表现抗性。其中的两个株系和直鹞%%。这可能是由于外源基因在植物体内表达差异引起的。通过表达,株系没检测到表达信号,藕疟冉先酢6鳺系没有特异性蛋白带出现,其它鲋晗档鞍拙玫教匾毂泶铮潜泶锪坎煌分子生物学检测和对斜纹夜蛾的抗虫性检测结果,都表明在转基因烟草中,苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白基因疨得到高效表达,这为构建高效抗虫的多价转基因作物提供了可靠的实验关键词:转基因烟草,苏云金芽孢杆菌,营养期杀虫蛋白,斜纹夜蛾营养期杀虫蛋白,撬赵平鹧挎吒司营养期杀虫蛋白虻暮塑账嵝蛄校呕参锵埠妹苈胱印?梢蕴岣吒没蛟谥参镏械淖B和翻译效率。的表达由组成型的舳忧僦詈铣擅富虻腘终止子终止。通过根癌农杆菌介转基因再生植株。对转基因烟草再生植株进行分子检测,〕棵阳性转基因植株进一步进行异性条带。虽然杂交不能反映外源基因在转基因植株中的拷贝数,但通过特异条对株粜灾仓杲锌剐蔽埔苟昊钚约觳猓晕醋;蜓滩菀镀魑6哉铡K俏棺;和迸一步验证外源基因在再生植株中的表达情况。其中结果表明鲎;蛑仓曛杏个得以检测结果也同样显示,株依据。
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导师签名:’必∥‘蹈独创性声明关于论文使用授权的说明研究生签名:张舌荥研究生签名:张番泉辏拢日时间:,桑年∥月,;日厶晔拢日C艿难宦畚脑诮饷芎笥ψ袷卮诵本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得黑龙江八一农垦大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全了解黑龙江八一农垦大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意黑龙江八一农垦大学可以用不同方式在不同刊物上发表,传播学位论文的全部或部分内容。时间:/,、
第一章绪论研究的目的和意义的研究刚刚开始。因而,通过改造微生物来源的新型高毒力营养期杀虫蛋白聊基因的核苷酸序国内外研究现状抑制剂∽近年来,人们发现苏云金芽孢杆菌目前从苏云金芽孢杆菌中分离鉴定的虼锏鲎笥遥捎谒嵌际俏⑸锢丛吹因进行改造并己被应用于棉花的遗传转化,现正在进行大面积的田间实验,而国内对于列,优化植物喜好密码子,提高该基因在植物中的转录和翻译效率,对培育转基因抗虫植物、控制害虫抗性发展都具有重要的意义。价值达数千亿美元⋯。在我国,因虫害水稻减产在%以上,小麦减产近%,棉花减产在%以害虫。但化学杀虫剂不仅造成不可再生资源的巨大浪费、而且造成了严重的环境污染,同时还促杀虫剂在一定程度上克服了化学杀虫剂的缺点,但很难同时管理作物、害虫、捕食者霾煌养层次的生态种群,且见效慢、杀虫谱窄、受环境条件影响大,因而限制了其广泛应用,用量不到杀虫剂市场的ァD壳敖鲈谥秩罕涠喽晕榷ǖ奈率液蜕种泄惴菏褂茫谝荒晟魑锷鲜褂较少。从上世纪八十年代以来,随着现代分子生物学技术的快速发展,利用基因工程手段培育抗虫作物已成为当今防治虫害的另一重要途径。植物抗虫基因工程的研究不断为害虫的防治提供新的思路,给农业微生物的研究注入新的活力,现已成为微生物遗传改良的有效途径。至今已克隆得到的抗虫基因有很多种,根据它们的来黑龙江八一农垦大学硕士学位论文谟Q诜置诘囊恢中滦杀虫毒蛋白即营养期杀虫蛋白,哂卸粤鄢崮坷コ婀谱的杀虫活性,该蛋白对一些杀虫晶体蛋白不敏感的昆虫缧〉乩匣ⅰ⒉莸靥耙苟辍⑻鸩艘苟辍烟蚜夜蛾等哂泄惴荷背婊钚裕矣隑背婢宓鞍,饔机理完全不同,是一种新型的杀虫蛋白。杀虫基因,必须对其进行人工改造才能用于植物的遗传转化。美国公司最先对农作物的高产受到很多因素的影响,虫害就是其中非常重要的因素之一。全球每年因施用化学杀虫剂防治农业害虫的费用高达诿涝#词谷绱耍磕瓿