氨基酸的薄层层析 实验报告.doc

氨基酸的薄层层析_实验报告生物化学实验报告
姓 名:
学 号:
专业年级:
组 别: 第四实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
氨基酸得薄层层析
实验日期
2015-11-09
实验地点
第四实验室
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
一、实验目得
。
,包括制板、点样、层析、显色。
(Rf值)来鉴定被分离得物质(本实验中即氨基酸混合液)。
二、实验原理
:本实验将硅胶作为固相支持物,羧***纤维素钠作为黏合剂,两者得混合物作为固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相展开溶剂在固定相上流动时,由于吸附剂对不同氨基酸得吸附力不一样、不同氨基酸在展开溶剂中得溶解度不一样,点在薄板上得混合氨基酸样品随着展开剂得移动速率也不同,通过吸附-解吸-再吸附-再解吸得反复进行,混合液中得氨基酸可以彼此分开。
:层析用硅胶就是一种多孔性物质,它得硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基(－Si－OH),这种极性得硅醇基能与许多化合物形成氢键而产生吸附。硅胶得吸附能力比氧化铝稍弱,其吸附活性也与含水量呈负性相关,故涂布操作前必须保证平板足够干燥。硅醇基显较弱得酸性,因而,硅胶只能用于中性、或酸性成分得分离,碱性成分不能用它分离,故混合氨基酸样品中得氨基酸组分均为中性或酸性氨基酸。硅胶得活化温度通常为105℃－110℃,不能过高,故活化过程中得烘干温度控制在70℃左右。
:茚三***水化后生成水化茚三***,它与氨基酸得羧基反应生成还原茚三***、氨基醛,与此同时,还原茚三***又与氨基茚三***缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。(氨基酸显色反应得化学方程式参见下图)
4. Rf值鉴定混合氨基酸中含得氨基酸种类:层析中,物质沿溶剂运动方向迁移得距离与溶液前沿得距离之比为Rf值。由于物质在一定溶剂中得分配系数就是一定得,故移动速率(Rf值)也就是恒定得,因此可以根据Rf值来鉴定被分离得物质。
三、材料与方法

1、1样品:
(1)氨基酸标准溶液:0、01mol/L丙氨酸,0、01mol/L精氨酸,0、01mol/L甘氨酸
(2)混合氨基酸溶液:以异丙醇作为溶剂将0、01mol/L丙氨酸,0、01mol/L精氨酸,0、01mol/L甘氨酸按等体积制成混合溶液
1、2试剂:
硅胶、0、5%得羧***纤维素钠、展层-显色剂(正丁醇、乙酸、水、茚三***溶液)
1、3仪器:
层析板、尺子、铅笔、药匙、玻璃棒、50ml小烧杯、10ml量筒、托盘天平、毛细玻璃管、层析缸、烘箱、吹风机
2、实验方法
2、1实验流程:
制作硅胶层析板
在层析板上点氨基酸样品
对氨基酸样品进行层析
对氨基酸样品进行显色
2、2实验步骤:
步骤
操作
(1)制作硅胶层析板
1、调浆:称取硅胶3克,加0、5%得羧***纤维素钠8毫升,调成均匀得糊状。2、涂布:取洁净得干燥玻璃板均匀涂层。3、干燥:将玻璃板水平放置,室温下30min自然晾干。4、活化:70℃烘干30分钟。
(2)在