地衣芽孢杆菌α淀粉酶定向进化研究硕士论文.pdf

兰州大学
硕士学位论文
地衣芽孢杆菌α-淀粉酶定向进化研究
姓名:周向军
申请学位级别:硕士
专业:生物学生物化学与分子生物学
指导教师:吴应文
20060601
原创性声明论文作者签名:钏苤日期::本人所呈交的学位论文,是在导师的指导下独立进行研究所取得的科研成果。对本人的研究成果做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。地衣芽孢杆菌淀粉酶定向进化研究成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等,均已明确注明出处。除文中已经注明引用的内容外,不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的本声明的法律责任由本人承担。兰州大学硕士学位论文
论文作者签名:。日期:竺型完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定,同意学校保存或国家有关部门或机地衣芽匏杆菌淀粉酶定向进化研究本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属兰州大学。本人构送交论文的纸质版和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权兰州大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或该论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为兰州大学。兰州大学硕士学位论文
地衣芽孢杆菌坏矸勖付ㄏ蚪芯中文摘要目的:本文主要对地衣芽孢杆菌透呶耡一淀粉酶基因进行克隆、表达、及方法:查阅霞禾峤坏牡匾卵挎吒司鷄一淀粉酶基因编码序列,设计引物扩增出坏矸勖富虿铮笮∥焕肞技术截取上游胁锊庑颍用巢式┰龀笮〉腶一淀粉酶基因产物,回收目的片段,克隆至大肠杆菌;经过蛋白诱导表达,破壁进行酶活测定;用测定淀粉酶融合蛋白分子量;利用技术连接成完整的坏矸勖竿槐浠颍豢寺≈链蟪Ω司肞鉴定及锥虫蓝培养基筛选阳性克隆;通过蛋白诱导表达,进行酶活性及蛋白质分子量测定;测序确定突变位结果:本实验利用际醮拥匾卵挎吒司鶦中扩增出坏矸勖富颍肿酶基因具有很高的同源性,同源性达到%;连接至—靥澹;蟪Ω司鶧⑸秆〕个阳性克隆;经诱导、表达淀粉酶融合蛋白,狿缬鞠允痉肿恿看笮∥取号阳性克隆质粒作为模板,利用易错际醵阅康幕蚪和狡畏肿油槐洌詈笾氐由斓玫酱笮∥牡矸勖竿槐浠颍连接至—靥澹;蟪Ω司米冻胬杜嘌癙鉴定,筛选出地衣芽孢杆菌淀粉酶定向进化研究定向进化的研究。果表明与其它芽孢杆菌属来源的坏矸勖富蚓哂泻芨叩耐葱裕葱源锏ィ焕易错际踅畏治和礁銎谓蟹肿油槐洌弥氐由点。量大小为;扩增上游蠵产物测序,结果表明与其它芽孢杆菌属来源的ǖ矸利用巢式际醭晒Φ睦┰龀鰊一淀粉酶基因,大小为;经超声波破壁后测定胞内淀粉酶活性,结果显示:活力达到;兰州大学硕士学位论文;
结论:利用定向进化技术对坏矸勖富蚪辛朔肿痈男裕晒Φ幕竦昧私细呋钚缘地衣芽孢杆菌淀粉酶定向进化研究阳性克隆;经诱导,表达得到坏矸勖溉诤系鞍祝肿恿看笮∥,测得胞内淀粉酶活性达到了;测序鉴定突变点三处:琓,嘤Π被岜浠#彼嵋桓拾彼幔亮氨酸一异亮氨酸;苏氨酸一丝氨酸;淀粉酶菌株,初步建立了体外酶分子定向进化技术平台。关键词:地衣芽孢杆菌,淀粉酶,克隆,表达,大肠杆菌,易错氐由焱槐兰州大学硕士学位论文
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缩略词表溴化乙锭三羌谆氨基甲烷讳逡一氯一贿胚嵋籅—狟地衣芽孢杆菌淀粉酶定向进化研究缩写英文名称中文名称低熔点琼脂糖氨苄青霉素碱基对二硫苏糖醇脱氧核苷三磷酸二甲基亚砜乙二胺四乙酸异丙基硫代一狣肴樘擒培养基聚丙烯酰胺凝胶电泳聚合酶链式反应十二烷基硫酸钠缓冲液琋,琋一四甲基乙二胺半乳糖苷重叠延伸兰州大学硕士学位论文獴—猙——琋,疦’一————!猧—
一刖’舌坏矸勖傅难芯拷坏矸勖傅男灾坏矸勖傅姆⑾坏矸勖傅谋曜济剖牵簄,黄暇厶且一葡聚糖水解酶,从分子内部切去,惶擒占沟矸鄯肿恿垦杆俳档停伤苄院ā⒙笱刻恰⑵键而使底物水解,其终产物为葡萄糖、还原糖、极限糊精和含有四个以上葡萄糖残基的低聚糖。第二类为坏矸勖福拥孜锓腔乖阅┒嗡炒嗡饷扛觫蛞籰,擒占麦芽糖。第三类为葡萄糖淀粉酶,习惯上称为糖化酶,从底物非还原性末段顺次水解一糖苷键和,擒占善咸烟恰5谒睦辔=饧济富蛞斓矸勖福凰馓窃蛑链淀粉分支点,擒占邢抡霾嘀Α从淀粉酶的发现至今坏矸勖傅闹掷嘣嚼丛蕉啵凑帐褂锰跫煞治V形隆⒏呶隆耐酸、耐碱型。按产生菌不同可分为细菌、真菌、植物动物淀粉酶。目前工业生产都以微生物发酵大规模生产为主。生产中应用的菌株有:枯草芽孢杆菌地衣芽孢杆菌,嗜热脂肪芽孢杆菌淀粉是由葡萄糖组成的用途十分广泛的高分子物质。利用淀粉制备成的食品如粉丝等可直接利用。