毕赤酵母表达猪γ干扰素及其抗病毒生物学活性研究.pdf

中国农业大学
硕士学位论文
毕赤酵母表达猪γ干扰素及其抗病毒生物学活性的研究
姓名:万建青
申请学位级别:硕士
专业:预防兽医学
指导教师:夏春

文摘要中抗病毒生物学活性。。菸颐且芽寺〉,狙芯砍晒Φ难强寺×酥淼腎吖基因,基因全长嗦个为了在我国研制生物工程重组猪干扰素类制剂,防制猪病毒性传染塑和进一步效表达株,将筛选出的阳性转化子首先在缓冲甘油复合培养基除,换入诱导培养基一缓冲甲醇复合培养基一滤泡性口炎病毒低常褂孟赴”湟种品ú舛╮的开展猪干扰素的分子生物学研究,本研究率先利用毕赤酵母在其成熟肽和终止密码子序列问分别设计了含虰酶篔坏愕囊欢砸铮采取聚合酶链式反应ǘ訮辛搜强寺产物经纯化回后以虰双酶切,,转化大肠杆菌惺芴赴煤避星嗝顾的平板筛选阳性克隆,并对重组菌进行ā和盖屑ㄒ约序列测定。在大肠杆菌中成功构建了重组表达质粒./。随后用电激转化法将重组表达质粒./绱┛椎既氡铣嘟湍窯/阾以选择性培养基基本甲醇培养基,突酒咸烟桥嘌,培养旌笊秆⊙粜越湍钢刈榫NA颂粞「,以甘油为碳源信嘌渖ぶ帘ズ妥刺胄娜,以甲醇作诱导物盏急泶天,再离心收集菌体、超声波裂解,应用甈治錾秆「咝П泶飏慕湍妇辍H缓笥肳试验分析鉴定。将鉴定后的重组干扰素蛋白充分透析后,采用牛肾细胞氨基酸组成的成熟多肽。构建的整合表达质粒—/诮湍钢刈榫鶪/泶中成功表达了蛋白分子量为笥业腎糖基化蛋白。抗病毒生物学活性
本研究为生物工程发酵生产猪熏组卜干扰素打下了的基础。。测定的结果表明目共《净钚缘姆段猪型干扰素毕赤酵母关键词基因表达抗病毒活性/。
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言⒁表达并呈递抗原多肽。慢单核巨噬细胞主要的激活因子粲隩或白细干扰素概况绝大多数脊椎动物都可产生干扰素【”。:一类在同种细胞上具有广谱抗病毒活性的蛋白质,其活性的发挥又受细胞基因的调节与控制,涉及偷鞍字实暮铣桑锤扇潘厥且焕嗄苡盏既思岸锵赴嘀广谱抗病毒蛋白的类激素蛋白,具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等生物学活性薄组成的不同可分为透扇潘睾虸透扇潘亍型干扰素主包括畁,和,,它们具有相关的结构并共用同一受体谝皇芴,前三种主要是对病毒感染的应答产生的,能诱导机体抗病毒蛋白的产生。型干扰素又称免疫干扰素,即畒,是一种包含大约—堑ノ坏亩厶逄堑鞍祝苫罨腡淋巴细胞和细胞产生,与型干扰素使用的受体不同,它与第二类受体相结合,因而在生物学功能上显示出独特的免疫调节作用‘”。芄患せ頣淋巴细胞产生各种淋巴因子,促进分子大量胞介素嫌媚茉黾悠渥饔谩是细胞、血管内皮细胞的激活因子慨庖呦低车鹘谧饔镁哂辛街匦裕蠹亮烤哂幸种艬细胞产生抗体的效应,而低剂量则能促进抗体的形成嘲。.
被运载到细胞内【M被宕嬖诤铣煽共《镜鞍椎幕颉!8扇潘丶せ罨,受体和相应的酪氨酸激酶作用,使特定的胞质蛋白一信号转导及转录活化蛋白干扰素诱导基因转录激活的信号传递途径与许多激素不同,由于其受体自身缺乏激酶活性,所以必须借助于胞质中与其连接的酪氨酸激酶,才能完成信号传递。干扰素通过其式作用序列结合对于干扰素吖,它与受体结合导致酪氨酸激酶和的酪氨酸残基磷酸化,又将蛋白一睦野彼崃姿峄姿峄腜形成二聚体并移位至细胞核中,同干扰素吖诱导基因的干扰素吖激活位点<岷希佣舳蜃B盜。,干扰素与周围同种靶细胞膜的特异性受体相结合,但在正常状态下⒉槐泶铮扇潘亟胂赴笥丈没的激活因子,使特定的细胞基因去抑制而被激活,转录合成特定的,并迅速转移到细胞浆核糖体翻译成数种非特异性的抗病毒蛋白’铣擅赶低合成酶在被双股激活的情况下,,又能活化细胞中处于潜伏状态的核酸酶:笳被活化后可切割单链芴匾煨缘厍锌2《緈⑹蛊浣到猓旱鞍准っ冈诒双股及三磷酸腺苷せ畲嬖谙虏陨砹姿峄患せ睿淞酸化位点在蛋白激酶蛋白腟和谢稀<せ畹牡鞍准っ甘共《竞铣傻摹捌蛋白的抗病毒活性可能还与它结合病毒转录酶有关。扇潘赜隺、扇潘氐淖饔的酪氨酸磷酸化,经过磷酸化而被激活后,移位至细胞核,同干扰素诱导基因的顺岷希潭舳没虻淖B糩鞍准っ⒘姿岫以及蛋白等。其中丫巯佘始因子⑸姿峄Щ睿佣瓒喜《镜鞍椎暮铣桑毫姿岫缚赡苡胱柚病毒的翻译有关【”篗鞍卓梢种普巢《荆缌鞲胁《竞蚔的复制,通常蛋白同岷弦约八哂蠫富钚允荕鞍捉榈枷赴共《舅匦氲模中国农业大学硕士学位论文
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