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人环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒.doc


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人环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒.doc
文档介绍:
人环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒
(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)

原理
本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 cGMP 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 cGMP与单抗结合,加入生物素化的抗人cGMP,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在450nm处测OD值,cGMP浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中cGMP浓度。
试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells)
96孔
酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate)
12ml
10×标本稀释液(Sample Buffer)
12ml
20×浓缩洗涤液(Wash Buffer)
50ml
标准品(Standards):60pmol/瓶
2瓶
底物工作液(TMB Solution)
12ml
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody)
12ml
终止液(Stop Solution)
12ml
准备试剂与收集血样
收集标本:血清、血浆(EDTA、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反复冻融。尿液、唾液、支气管液、细胞培养上清1:5倍稀释。血清、血浆至少1:20倍稀释。
标准品液配制:使用前加入0.3ml蒸馏水混匀,配成200pmol/ml的溶液。设标准管8管,每管加入标本稀释液300ul。在第一管中加入200pmol/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。
10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。
洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序
加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
洗板:同前。
每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
洗板:同前。
每孔加入底物工作液100ul,置3
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  • 时间2021-06-09