人环磷酸鸟苷（cGMP）ELISA试剂盒.doc

人环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒
(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 cGMP 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 cGMP与单抗结合，加入生物素化的抗人cGMP，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，cGMP浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中cGMP浓度。
试剂盒组成（2-8℃保存）
酶标板（Coated Wells）
96孔
酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）
12ml
10×标本稀释液（Sample Buffer）
12ml
20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）
50ml
标准品（Standards）：60pmol/瓶
2瓶
底物工作液（TMB Solution）
12ml
第一抗体工作液（Biotinylated Antibody）
12ml
终止液（Stop Solution）
12ml
准备试剂与收集血样
收集标本：血清、血浆（EDTA、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。尿液、唾液、支气管液、细胞培养上清1：5倍稀释。血清、血浆至少1：20倍稀释。
标准品液配制：，配成200pmol/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液300ul。在第一管中加入200pmol/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。
10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。
洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）
检测程序
加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
洗板：同前。
每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
洗板：同前。
每孔加入底物工作液100ul，置3