《同型半胱氨酸介导的内质网应激对肝细胞脂质代谢的影响》.pdf

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同型半胱氨酸介导的内质网应激对肝细胞脂质代谢的影响木．．．lipids(TOEclio)in11123．篢(No[2004]28l)(No20041234)10004718(2007)12-241405(13120002200025虾＝煌ù笱б窖г焊绞羧鸾鹨皆焊腥究疲虾【摘要】目的：探讨同型半胱氨酸榈嫉哪谥释ざ愿蜗赴蚀坏挠跋臁７椒ǎ際细胞共孵育，检测细胞内⒏视腿ァ⒌ü檀嫉暮俊８叩鞍彼嵋秤盏夹∈蟾逪血症，分析(TeE)(CliO)78(GP,J78)(SREBP1)mRNAHcyHepG2Hcy(TGECHO)(P<O050h)HcyTGECHO0(P<O05)TGECHO(P>O050)GRPmRNAO(P<005)Hcy醇调节通路失调，并使肝细胞合成、摄取甘油三酯、胆固醇增加。【关键词】高半胱氨酸；内质网；应激；脂质代谢R5755南妆晔堵搿緼ChungenlRENGuangyuanlZHUDongfan91NI—，Hui，DiseasesRuqin。，瓻—：甤緼：homocysteine(Hcy)mediatedhepatocytesMETHODSHepG2OuooregulatedHcy(P<005tt$0甌week)Howev-change(P>0050．：猧WORDS]HomocysteineEndoplasmic[20060509]20060913籈—：萨甤．hep0cytwereprotein(SREBP··mmolL-78SREBP1，200025China5Departmem甌．dietinducedmicetheanalyzedTheerthe阳pathwayalso緀CHO籗籐
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RNAAMV4225PCR(homocysteineHcy)材料和方法36(C)41kgBiotechnologyWestern肝组织TrisHCI371h结果()导酵母、人成纤维细胞、血管内皮细胞内质网应激，且与这些细胞损伤相关１狙芯磕馓教諬诱导的内质网应激对肝细胞脂质代谢的影响。lHepG2赠。赴糜诤バ∨ＱG濉⑶嗝顾UL100mgLaDMEM(Life公司嘌褐校尤際张ǘ，在℃、培养箱中孵育。取培养后、和腍细胞，分别用—、飨吹次。洗涤后一部分细胞CH0TGE3冻、复温使细胞裂解，离心，弃沉淀，用美国低撤治鲆羌觳庀赴谧蹾含量，结果以Hey(p,molg)介导内质网应激小鼠肝损伤模型小鼠购于中国科学院上海实验动物中(205)g3和mgkg(Sigma)②高蛋氨酸组：进食对照组饲料，但饮水中含％蛋氨酸；③高蛋氨酸／低叶酸组：饲料中含gkg15／叶酸，饮水中添加％蛋氨酸。各组在饲养、和周随机取小鼠唬直鹗占疎鼓=觳釮(ImolL)703CHOTGE椴煌车腃／∈笏茄周后，分6CHOTGE500WRl339(于荆艽碳じ蜗赴置贑和，之后于、和hEDTA含量疞。用％缓冲液裂解不同时间嘌蟮腍细胞，按文献方法用乙烷一丙(32)CHOTGECHO坑氤樘嵋褐凶艿鞍字时戎／表示¨】。∈蟾巫橹疓剐町蜝及蛋白的检测41TfizolInvitrogenRTPCRPromegaTriton蛋白裂解液购于荆笫罂剐∈驡、、DHIgGSantapactinSREBP1GRP78物由上海生工公司合成，各引物序列为：猘bp)5CTAGG35CGG3SREBPl(