石蜡切片制作过程.doc

(一)材料与用具 1 .材料:鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。 2 .用具:溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。(二)实验内容与步骤 1 .取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。组织块的大小以不超过 立方厘米为宜。切去组织块时动作要轻,切忌用力牵引或挟持,以免组织内部发生变化。组织块取下后,先用先用 %的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍,如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净, 可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次, 使其管腔冲洗干净,切忌不可用刀或其他器具刮之。由动物身上切取的组织必须是新鲜的,材料越新鲜越好,一般不应超过死后 24 小时。如果是管状器官或是其中有分泌之消化液,则死后应迅速采取,以免组织自溶或上皮剥落。材料由动物体取下后应当迅速固定,固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部,将组织固定, 以保持其原有的结构。不同的组织应选用适当的固定液。固定液的用量与组织块体积之比一般在 20 :1 。不应使组织块贴于容器壁上,应记录固定液的名称,材料的种类,动物品种及开始固定的时间。 2 .冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。组织块应用纱布包好,注名, 放金属水洗网中用流水冲洗, 甲醛固定液固定的组织一般水洗 24 小时, Bouins 固定液固定的组织水洗 24 小时。 AFA 固定液则不需要水洗。 3 .脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水,脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来, 使组织逐渐变硬, 便于油类或其他透明及浸入, 为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。常用的脱水剂是不同浓度的酒精,因为酒精与水有很大的亲和力,酒精浓度可以逐渐升高, 置换出组织中的水。脱水必须充分, 脱水不充分会影响透明和浸蜡。脱水过程要逐级上升,不能操之过急,跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。脱水所用的酒精浓度及过程如下: 30 % —→ 50 % —→ 70 % —→ 80 % —→ 90 % —→ 95 % —→ 100 %(Ⅰ) —→ 100 %(Ⅱ) 组织块在各级较低浓酒精( 小于 70 %) 中脱水的时间应视组织块的大小而定, 大小不超过 立方厘米的组织块脱水时间为 6~ 12 小时,在高浓度酒精中(大于 70 %)脱水时间为 3 小时左右。组织块在无水酒精中需经过两次处理,以保证脱净水分。由于无水酒精有使组织变脆的缺点,故在无水酒精中脱水的时间不宜过长,一般应在 15 ~ 30 分钟左右。在脱水瓶中酒精的量与组织块之比约为 50 :1。简化步骤如下: 70% ( 一夜) —— 80% (1 小时) —— 90% ( 30 分) —— 95% ( 30 分) —— 100% (15 分) ——酒精+ 二甲苯( 15 分) ——二甲苯(3分) ——石蜡+ 二甲苯( 30 分) ——石蜡( 80 分) 4 .透明透明是石蜡切片法切片前必经的一步。其目的在于用矿物油或植物油等透明剂置换出无水酒精, 以便于熔化的石蜡浸渗到组织间隙中, 故透明剂必须是能分别与石蜡和酒精相溶的。经过透明剂处理的组织块用肉眼对光观察呈透明现象,所以这个过程称为透明。常用的透明剂有二甲苯、苯、甲苯等,这些都是穿透力强易使组织变脆的透明剂,因此透明的时间宜短,一般在 20 分钟即可。透明时组织块由无水酒精中取出,先放入二甲苯和无水