黄酮标准曲线绘制的实验报告.doc

黄***标准曲线绘制的实验报告
黄***标准曲线绘制的实验报告
***的测定
实验仪器
电子天平AR2140;
紫外可见分光光度计UV2754;
型数控超声波清洗器KQ3200DB;
超级恒温槽;
Rotavapor R200 旋转蒸发仪 ;
FD21C250 冷冻干燥机2
试剂及药品
芦丁 标准品
***铝 国产分析纯（配成5 %）
亚***钠 国产分析纯（配成10 %）
氢氧化钠 国产分析纯配成（配成1mol/L）
95%乙醇，无水乙醇 国产分析纯（配成60%乙醇 50%乙醇）
DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基）
Vc（Ascrobic acid，维生素 C，抗坏血酸）
没食子酸对照品：基准纯。
大青叶子 采摘于海南大学东坡湖畔
：

样品60℃烘干粉碎机粉碎，过20目筛，装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄***在波长为510nm处吸收值最大。

精密称取120 ℃,用60%乙醇溶解后定容至25mL 容量瓶中,摇匀，。

、、、、、、 ,分别置于10mL 容量瓶中，并定容至刻度线。、、、、、、，分别取1ml到试管中各加
5 %亚*** 摇匀,放置6min ,加10%*** 摇匀,放置6min ,加1mol /L氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min 后,分别在510nm 处测定其吸光度（Tai,Cai&Dai,2011）。（以试剂空白做参比）
以吸光度A 为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线。用最小二乘法进行线性拟合,得c与A 的线性回归方程以及相关系数R2。
序号
浓度（ug/ml）
吸光度
1
0
0
2
15

3
30

4
45

5
60

6
75

7
90

表1-1： 芦丁标准曲线测定数据
图1-2：芦丁标准曲线

根据查阅文献总黄***在波长为510nm处吸收值最大。取黄***提取液， 取提液2ml至10ml的比色管中用60%的乙醇定容至刻度线则稀释5倍。取稀释好的溶液4份1ml置入10ml的比色管中，其中一份用60%的乙醇定容，作为参比溶液。其余各份各加5%亚*** 摇匀,放置6min ,加10%*** 摇匀,放置6min ,加1mol 氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min后,分别在510nm处测定其吸光度。代入标准曲线回归方程可得浓度数据（以芦丁为参比）,三次结果取平均值。经换算后得样品中总黄***含量。
样品总黄***含量(mg/g)=X*n*V1/( V *W)
式中：X—测出的浓度，mg/ mL;（直接代入，不用换算。）
n—稀释倍数，量纲为1;
VI—样液总体积，mL;
V—测定时取样体积，mL;
W—样品质量，g。

实验仪器
ALZO4型电子分析天平:上海梅特勒一托利多仪器有限公司;
DELA犯O型pH计:上海梅特勒一托利多仪器有限公司;
723可见分光光度计:上海菩华科技仪器有限公司;
DK一512型电热恒温水浴锅:上海森信实验仪器有限公司;
容量瓶(250mL，10OmL，25mL)、比色管管(10mL);
烧杯、移液管、吸耳球。

没食子酸对照品：基准纯，购于上海分析试剂厂，置50℃真空干燥箱真
空中干燥4 h。乙醇为工业级，蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
Folin—Ciocalteu比色法测定总酚酸含量
Folin—Ciocalteu试剂的配制
称取20 g钨酸钠和5 g钼酸钠于圆底烧瓶中，用140 ml蒸馏水溶解，加入10ml 85％的磷酸溶液和20 ml浓盐酸，文火回流10 h，然后加入3 g硫酸锂及15 ml双
氧水，加热沸腾15 min至亮黄色，不得带微蓝和绿色。冷却，移入250 ml容量瓶中，定容，贮于棕色瓶中，4℃冰箱保存