黄酮标准曲线绘制实验报告.doc

黄***标准曲线绘制实验报告
黄***标准曲线绘制的实验报告 1. 总黄***的测定 1 1 .1 实验仪器 电子天平AR2140; 紫外可见分光光度计UV2754; 型数控超声波清洗器KQ3200DB; 超级恒温槽; Rotavapor R200 旋转蒸发仪 ; FD21C250 冷冻枯燥机2 1. 2 试剂及药品 芦丁 标准品 ***铝 国产分析纯（配成 5 %） 亚***钠 国产分析纯（配成 10 %） 氢氧化钠 国产分析纯配成（配成 1mol/L） 95%乙醇，无水乙醇 国产分析纯（配成 60%乙醇 50%乙醇） DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基） Vc（Ascrobic acid，维生素 C，抗坏血酸） 没食子酸对照品：基准纯。
大青叶子 采摘于海南大学东坡湖畔 3 实验步骤：
及波长确实定 样品 60℃烘干粉碎机粉碎，过 20 目筛，装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄***在
波长为 510 处吸收值最大。
精密称取 120 ℃枯燥至恒重的芦丁标准样品 置于 100mL 烧杯中,用 60%乙醇溶解后定容至 25mL 容量瓶中,摇匀，即可得 的芦丁标准溶液。
及绘制标准曲线 精密吸取芦丁标准溶液 、、、、、、 ,分别置于 10mL 容量瓶中，并定容至刻度线。得到 、、、、、、 的标准品溶液，分别取 1ml 到试管中各加 5 %亚***钠溶液 摇匀,放置 6min ,加 10%***铝溶液 摇匀,放置 6min ,加 1mol /L 氢氧化钠溶液 4mL ,再用 60%乙醇溶液稀释至刻度,放置 15min 后,分别在 510 处测定其吸光度（Tai,Cai&Dai,xx）。（以试剂空白做参比） 以吸光度 A 为纵坐标,浓度 c 为横坐标,绘制标准曲线。用最小二乘法进行线性拟合,得 c 与 A 的线性回归方程以及相关系数 R2 。
序号 浓度（ug/ml） 吸光度 1 0 0 2 15 3 30 4 45 5 60 6 75 7 90 表 1-1：
芦丁标准曲线测定数据 图 1-2：芦丁标准曲线 根据查阅文献总黄***在波长为 510 处吸收值最大。取黄***提取液， 取提液 2ml 至10ml的比色管中用60%的乙醇定容至刻度线那么稀释5倍。取稀释好的溶液4份1ml置入10ml的比色管中，其中一份用 60%的乙醇定容，作为参比溶液。其余各份各加 5%亚*** 摇匀,放置 6min ,加 10%***铝溶液 摇匀,放置 6min ,加 1mol 氢氧化钠溶液
4mL ,再用 60%乙醇溶液稀释至刻度,放置 15min 后,分别在 510 处测定其吸光度。代入标准曲线回归方程可得浓度数据（以芦丁为参比）,三次结果取平均值。经换算后得样品中总黄***含量。
样品总黄***含量(mg/g)=X*n*V 1 /( V *W) 式中：X—测出的浓度，mg/ mL;（直接代入，不用换算。） n—稀释倍数，量纲为 1; V I —样液总体积，mL; V—测定时取样体积，mL; W—样品质量，g。
2. 总分含量的测定 实验仪器 ALZO4 型电子分析天平: 梅特勒一托利多仪器; DELA 犯 O 型 pH 计: 梅特勒一托利多仪器; 723 可见分光光度计: 菩华科技仪器; DK 一 512 型电热恒温水浴锅: 森信实验仪器; 容量瓶(250mL，10OmL，25mL)、比色管管(10mL); 烧杯、移液管、吸耳球。
2 试剂及药品 没食子酸对照品：基准纯，购于 分析试剂厂，置50℃真空枯燥箱真 空中枯燥4 h。乙醇为工业级，蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 2 .3 Folin — Ciocalteu 比色法测定总酚酸含量 Folin—Ciocalteu试剂的配制 称取20 g钨酸钠和5 g钼酸钠于圆底烧瓶中，用140 ml蒸馏水溶解，参加10ml 85％的
磷酸溶液和20 ml浓盐酸，文火回流10 h，然后参加3 g硫酸锂及15 ml双 氧水，加热沸腾15 min至亮黄色，不得带微蓝和绿色。冷却，移入250 ml容量瓶中，定容，贮于棕色瓶中，4℃冰箱保存。
准确称取15