基于SCAR分子标记的头花蓼分子鉴定研究.doc

基于SCAR分子标记的头花蓼分子鉴定研究.doc基于SCAR分子标记的头花蓼分子鉴定研究
［摘要］目的：建立快速准确的头花蓼与尼泊尔蓼药材的分子标记鉴 定方法。方法：通过RAPD随机引物筛选，获得头花蓼特异的RAPD分子标 记片段，经克隆、测序，重新设计特异性引物转化形成稳定的SCAR标记。 结果：获得2条稳定扩增的头花蓼特异片段Z300, Z1100,根据该2特异 片段序列设计4对特异引物，分别对头花蓼与尼泊尔蓼药材DNA进行扩增, 其中引物Z1 -2可从头花蓼药材中扩增获得约300 bp的片段，而尼泊尔蓼 药材则未扩增出该片段。结论：引物Z1-2成功将Z300片段转化为SCAR 分子标记，可作为头花蓼与近缘种尼泊尔蓼药材分子鉴定的依据。
［关键词］头花蓼；尼泊尔蓼；近缘种；SCAR标记
［收稿日期］2012-12-21
［基金项目］国家“ ^一五”科技支撑计划项目(2009BA174B01)；贵 州省教育厅自然科学研究项目(黔教科2008026)；科技创新公共技术平台 建设项目(2010筑科合字第3-2号)
［通信作者］*周涛，教授，研究方向为分子生药学，E-mail： ******@163. com 头花蓼 Polygonum capitatum Buch-Ham. ex D. Don 和 尼泊尔蓼P. nepalense (Sect. Cephalophilon Meisn. ) ［1］,其药用具有地区性，在我国西南地区多用
于治疗风湿痹痛等疾病［2］。其中，头花蓼自20世纪90年代以来，作为 贵州特色苗药的代表，既是多个治疗泌尿道感染的中成药制剂原料［3-4］, 也建立了 GAP的规范化种植基地，开展了种质资源评价与优良种源筛选工 作。但就目前而言，头花蓼的栽培资源尚难以满足产品对原料的需求，野 生资源仍是其药材主要来源，由于头花蓼以全草类入药，药材干燥皱缩， 极易破碎，在头花蓼药材的市场收购中，出现了同属近缘种如尼泊尔蓼植 物掺混现象，造成头花蓼药材使用混淆。从头花蓼、尼泊尔蓼的本草、临 床使用来看[2],二者虽多用于治疗风湿痹痛等疾病，但在功能与主治上 有不同侧重点，头花蓼功效上偏重于利尿通淋，主要治疗泌尿道感染、肾 盂肾炎；尼泊尔蓼则偏重于治疗风湿痹痛之症，主要用于咽喉肿痛、赤白 痢疾、风湿痹痛等症。因此，准确鉴定头花蓼药材，避免采收、生产上的 伪品掺杂是确保头花蓼临床疗效可靠的关键。
近年来，运用DNA分子标记方法开展中药材品种鉴定、药用植物种质 资源评价及其辅助育种等方面的研究已有大量报道[5-6] o序列特异扩增 区域(sequence charactered amplified region)标记技术即是在随机 扩增多态性 RAPD (randomly amplified polymorphic DNA)技术基础上发 展起来的一种可靠、稳定的分子标记，它是基于对基因组进行RAPD分析 后，将RAPD目标片段进行克隆测序，再对片段设计特定引物，以此引物 对基因组DNA再进行PCR特异扩增，可将与RAPD片段相对应的单一位点 鉴别出来[7-12] o SCAR标记具有更高的重现性，克服了 RAPD重复性欠佳 的弱点，并可以将显性标记转化为共显性标记[13],可借鉴应用于传统性
状鉴定、理化鉴定等方法难以解决的