人参皂苷Rb1及Rg3上调神经内肽酶表达抑制β淀粉样肽神经毒性作用研究.pdf

山东大学
博士学位论文
人参皂苷Rb1及Rg3上调神经内肽酶表达抑制β-淀粉样肽神经毒
性作用的研究
姓名：杨玲玲
申请学位级别：博士
专业：生物化学与分子生物学
指导教师：崔行
20090415
人参皂苷癛上调神经内肽酶表达抑制矸垩神经毒性作用的研究中文摘要生物化学与分子生物学导师：崔行教授今不清，但绝大多数研究者认同阿尔茨海默症是一种由于基因缺陷直接或间接由基生成增加，鞍琢姿峄葜时浠淮ザJВ窬褐试錾脱字反应等，最终出现神经元功能失调，死亡，斑块形成，神经原纤维缠结等病理现象。因而，抑制矸垩纳伞⒋俳鳥．淀粉样肽清除、降低矸垩亩性和促进神经元损伤后的修复等可作为阿尔茨海默症药物研究的重要靶标。近年来研究表明，神经内肽酶是脑内催化矸垩慕到獾墓丶福堑鹘诖竽矸垩乃降闹匾R蛩亍Ｒ虼耍究翁庖陨窬陔拿肝0械悖允嘀忠有研究表明对神经系统损伤有一定改善作用的天然药物进行研究；并构建高表达瑞典突变型淀粉样肽前体蛋白的神经母细胞瘤细胞作为阿尔茨海默症细胞模型，在细胞水平检测药物对矸垩牡慕到庾饔眉吧窬；ぷ饔茫豢寺∩经内肽酶基因启动子区域，初步探讨药物调节神经内肽酶活性的分子机制。专业：博士生：杨玲玲阿尔茨海默症是一种原发性神经元退行性疾病，是老年人群痴呆的最重要类型。阿尔茨海默症患者的典型病理表现为：脑内神经细胞间老年斑形成，神经细胞内神经纤维缠结，选择性神经元或突触丢失。阿尔茨海默症发病机制至改变淀粉样蛋白前体表达或蛋白酶解过程从而影响矸垩木奂榷ㄐ缘病理综合征。矸垩模个氨基酸组成的一组多肽，是老年斑的主要成分，也是阿尔茨海默症的主要致病物质，由淀粉样蛋白前体经．、丫．分泌酶次序降解产生，可被某些肽酶降解清除。正常情况下，矸垩牡牟清除处于平衡状态，但某些致病因素可致平衡失调，导致矸垩睦刍⒅渐形成不溶性纤维丝，从而引发连串的复杂反应，包括钙离子稳态失调，氧自山东大学博士学位论文
第一部分筛选能够提高神经内肽酶活性的药物【研究目的】获得能够提高神经内肽酶活性的天然药物。试验检测各天然药物对神经母细胞瘤细胞．细胞存活率的拿甘笛榉直鸺觳獠煌ǘ燃安煌奔淝榭鱿氯瞬卧碥誖及人参皂疞；葛根素疞；石杉碱甲疞；人参皂苷／蝗瞬卧活无明显影响或影响较小。药物时间梯度实验结果表明，有效作用时／瞬卧碥誖即能有效提高神经内肽酶活性，为未处理组的：ィ灰┪锱ǘ却镏疞时作用最强，为．％。选用畉疞人参皂苷惺奔涮荻仁匝椋峁允疽┪镒饔／瞬卧碥良苡行岣呱窬陔拿富钚ィ药物浓度达至．／弊饔米钋浚．％。选用／人参皂苷惺奔涮荻燃觳猓峁允疽┪镒饔效果最佳，为【研究方法】影响，确定药物的最佳浓度及作用时间。拿甘笛榧觳飧魈烊灰┪锒韵赴窬陔拿富钚缘挠跋臁苷《陨窬陔拿富钚缘挠跋臁【结果】┪锱ǘ忍荻仁笛榻峁砻鳎翰瓒喾疞；维生素／婚纹素豰／宦ǘ疞；大黄素疞；白藜芦醇疞；姜黄素畉疞；人参皂苷疞；人参皂苷苷／辉吨驹碥赵疞；知母皂苷疞对细胞存间为。瓒喾印⑷瞬卧碥誖和人参皂苷磕芄幻飨蕴岣呱窬陔拿富钚裕分别为未处理细胞的．％、．％、．％倍。Ч罴眩：ァ士ァ山东大学博七学位论文
第二部分表达瑞典突变型的赴闹票赣爰以及人参皂苷蚏的神经保护作用的研究确定了各天然药物的最佳浓度及作用时间。茶多酚、人参皂苷⑷参皂苷芄惶岣呱窬陔拿富钚浴Ｈ瞬卧碥誖对神经内肽酶活性的影响呈一定浓度梯度和时间梯度关系，／弊饔米钋浚罴炎饔檬奔为Ｈ瞬卧碥誖对神经内肽酶活性的影响亦呈一定浓度梯度和时间梯度【研究目的】粉样肽分泌能力及生物学性状变化；检测人参皂苷叭瞬卧碥誖的神【研究方法】灾侍錖￡吼榈贾刈橹柿．染神经母细胞瘤细胞．，利用进行筛选，周后，挑取单克隆、消化接种后继续培养建株，以直鹗占疭甋赴白H竞笙赴纳锨逡海噶C庖呶绞匝榧ü芄晃榷ū泶飐蛋白的细胞株命名为．细胞，作为阿尔茨海默症模型细胞进行实验。观察细胞形态学改变，【结论】关系，时作用最强，最佳作用时间为构建含瑞典突变型淀粉样蛋白前体虻谋泶镌靥澹唤表达鞍椎腟甋赴辏患觳釧鞍妆泶锉浠．淀经保护作用。菇ê瑂基因的表达质粒盖屑并测序。及酶联免疫吸附试验鉴定。直鸪樘酳甋赴白H竞笙赴鞍祝琖检测细胞鞍妆泶锴榭觥测细胞分泌和榭觥山东大学博士学位论文
分别以岬。儿人参皂苷．疞人参皂苷看里利用匝椴舛ㄏ赴ぴ鲋衬芰Γ嬷葡赴で摺没钚匝跆秸際昙荢甆．细胞及．细胞，流式细胞术检测，分析转染笙赴诨钚匝跛奖浠酶评胱犹秸隖流式细胞术检测，分析转染笙赴诟评胱铀奖浠，分析药物作用。皇占赴魇较赴踅屑觳猓治鲆┪锒杂谙赴蛲龅挠以畉