液相色谱柱子使用及保养.ppt

液相色谱实用技术色谱柱的使用和保养色谱柱的选择??非极性或极性较小的样品可用一般的非极性或极性较小的样品可用一般的 C18 C18 柱柱??酸碱性的化合物建议选用填料经封尾钝化过的酸碱性的化合物建议选用填料经封尾钝化过的 C18 C18 柱, 柱, PH PH范围范围 2-9 2-9 ( (12 12) ) ??糖类,氨基酸,有机酸,多环芳烃, 糖类,氨基酸,有机酸,多环芳烃, GPC GPC 有专用柱有专用柱键合相色谱柱?以硅胶为基质,通过化学键合方式把碳十八、碳八、***基等基团联在基质上作为固定相。这种固定相要占所有柱填料的 60-70% ?优点∶固定相稳定,不易流失固定相稳定,不易流失应用广泛,可使用多种溶剂应用广泛,可使用多种溶剂消除硅羟基的不良影响消除硅羟基的不良影响??缺点缺点∶∶ pH pH值不能小于值不能小于 2 2或大于或大于 8 8同样填料,各种牌号色谱柱不尽相同同样填料,各种牌号色谱柱不尽相同反相 HPLC 柱( C18 )的性能?常规 C18 填料的稳定性硅胶基质填料硅胶基质填料 pH pH范围: 范围: 2-8 2-8 pH pH值大于值大于 7 7时时键合相粉碎或溶解键合相粉碎或溶解 pH pH值小于值小于 2 2时时键合相的化学键断裂键合相的化学键断裂经常用缓冲液经常用缓冲液固定相降解固定相降解??填料新的键合技术填料新的键合技术 - - PH PH 范围范围 2-12 2-12 - - 稳定性好,使用寿命长稳定性好,使用寿命长 1 2 3 4 5 6 7 8 9 pH 硅胶的溶解曲线良好的色谱实验****惯?拿到一根新色谱柱时,先测柱效?保留在新色谱柱上测得的色谱图,并记录条件?定期检测柱效色谱柱的使用及操作?流动相的转换特别是特别是 GPC GPC 柱柱??流速流速( (压力压力) )的变化幅度的变化幅度??温度的变化幅度温度的变化幅度??专用色谱柱专用色谱柱∶∶样品及溶剂的要求样品及溶剂的要求记住∶拿到一根从未用过的色谱柱时 一定要先看其使用说明! 色谱柱的保养(一) ?样品方面除去微粒及杂质除去微粒及杂质了解样品在流动相中的溶解度了解样品在流动相中的溶解度?如样品的溶剂不是流动相,一定要用流动相试溶解度,防止其在流动相中析出了解样品与色谱柱的基质了解样品与色谱柱的基质/ /填料是否相互作用填料是否相互作用样品准备为什么溶剂和样品要过滤为什么溶剂和样品要过滤? ? ??溶剂和样品过滤非常重要,它会对色谱柱、仪器起到保护溶剂和样品过滤非常重要,它会对色谱柱、仪器起到保护作用,消除由于污染对分析结果的影响。作用,消除由于污染对分析结果的影响。??色谱柱:由于填料颗粒很细,色谱柱内腔很小,溶剂和样色谱柱:由于填料颗粒很细,色谱柱内腔很小,溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。??仪器:溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨仪器:溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损,同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。损,同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。样品过滤头的类型: 样品过滤头的类型: ?? 30mm 30mm 内径:适用于大进样量的过滤,由内径:适用于大进样量的过滤,由 μμ m m μμ m m 两种规格两种规格, ,材料有纤维素材料有纤维素, ,醋酸纤维醋酸纤维, ,聚四***乙烯。处理样聚四***乙烯。处理样品体积少于品体积少于 50 50μμl l。。?? 13mm 13mm 内径:适用于范围广的过滤,由内径:适用于范围广的过滤,由 μμ m m μμ m m 两种规格两种规格, ,材料为纤维素。材料为纤维素。?? 3mm 3mm 内径:适用于小进样量的过滤,由内径:适用于小进样量的过滤,由 μμ m m μμ m m 两种规格。处理样品体积为两种规格。处理样品体积为 7 7μμl l。。色谱柱的保养(二) ?流动相方面除去微粒除去微粒纯度的要求纯度的要求?超纯水,梯度实验时水中有机杂质含量要低(建议走空白检验) ?缓冲液的 pH值,在填料的允许范围内?缓冲液(盐)的浓度?溶剂:色谱纯,并与填料相匹配?溶剂中的杂质含量?注意溶剂的相容性,避免使用不相容的溶剂流动相对样品的溶解度流动相对样品的溶解度?有机溶剂或水的比例