鳖甲煎丸对肝纤维化模型大鼠CTGF影响的实验研究.pdf

争阁中两|廷结台摧础删论学术研讨会沦义策鳖甲煎丸对肝纤维化模型大鼠CTGF影响的实验研究’贺松其吕志平陈育尧刘水源张锡滔(第一军医大学中医系,广东广州51 0515) 摘要:目的:探讨结缔组织生长因子(connectiVC ti Ssue growth factor,CTGF)在肝纤维化大鼠的表达及鳖甲煎丸对其影响作用。方法:采用复合因素建立肝纤维化大鼠模型,用免疫组化方法观察鳖甲煎丸对肝纤维化大鼠肝组织CTGF表达的影响。结果CTGF在模型大鼠肝组织中表达明显增加,鳖甲煎丸能明显抑制大鼠肝纤维化组织CTGF的表达。结论:鳖甲煎丸可有效抑制肝纤维化组织CTGF 的表达,这可能是该药抗肝纤维化作用的分子机制之一。关键词:结缔组织生长因子;鳖甲煎丸;肝纤维化结缔组织生长因子(connective ti ssue growth factor,CTGF)是一种新发现的细胞因子,在 TGF一01的诱导下由成纤维细胞等间质细胞产生,反过来又介导TGF—p l对间质细胞的作用,如促进其增殖及胶原合成?。CTGF的异常高表达在肝纤维化的发生、发展过程中起着关键作用,已成为肝纤维化新的研究热点。临床研究表明鳖甲煎丸治疗肝硬化疗效显著”。1,实验研究局限于药效学研究,对药物的作用机制研究较少,未深入到细胞分子水平。为深入探讨该方治疗慢性肝病的分子机制,我们采用复合因素建立肝纤维化大鼠模型,观察了该方对大鼠肝组织中CTGF表达的影响,报告如下: 1材料与方法 11实验动物:雄性Wi Star大鼠62只,清洁级,体重(24 0±30)g,由第一军医大学实验动物中心提供,(合格证:粤检验证字第2002A04号)。 :鳖甲煎丸(杭州胡庆余堂有限公司生产,批号02 0602);秋水仙碱片(云南昆明制药集团股份有限公司出品,批号20030764);l一(汕头光华试剂厂产品);兔抗鼠CTGF抗体(工作浓度1:100)及Sa/iC试荆盒均为武汉博士德生物工程有限公司产品。 :62只Wi Star大鼠在正式实验前适应性饲养3天后随机分为5组,印正常对照组(A 组)、模型组(B组)、秋水仙碱组(C组)、鳖甲煎丸等剂量组(D组)和鳖甲煎丸高剂量组(E组), 正常组10只,其余各组均l 3只。整个实验过程中每三日称体重一次以调节药量。B、C、D、E 组参照文献”1进行模型复制:于实验第1天每只动物皮下注射4 0%(I;花生油 1009~:·】009一。%的单纯玉米粉加2 0% 的胆固醇的混合饲料喂养,并以30%乙醇为饮料。共6周。A组注射等量花生油,进食普通饲料并自由饮水。 :各组在第7周开始每日灌胃相应药物,c组每日灌服秋水仙碱 1009一;-1009~;;B组及 A组灌以等量蒸馏水作对照。每日1次,模型组及正常组给予等剂量的蒸馏水灌胃。共5周。末次给药24小时后,戊巴比妥钠麻醉,腹主动脉采血,离心留血清;部分肝左叶用1 0%中***尔马林溶液固定,石蜡包埋切片,常规HE染色,光镜下观察病理改变,及免疫组化备用。免疫组化染色采用 SABC法、DAB显色、苏木精复染。以PBS代替一抗作阴性对照。