实验十一淋巴细胞玫瑰花结实验.ppt

实验十一淋巴细胞玫瑰花结实验
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一、实验目的
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人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞受体,在体外一定条件下将人淋巴细胞与绵羊红细胞两者混合,可以形成以T细胞为中心,周围黏附着多个绵羊红细胞的花环,为E花环试验(erythrocyte rosette test)。应用最广的有总E花环试验(Et,t为total的缩写)和活性E花环试验(Ea,a为active 的缩写)。Et代表被检标本中T淋巴细胞的总数,Ea则反映具有高亲和力绵羊红细胞受体的T细胞数,这部分T细胞的免疫学功能更能反映机体细胞免疫功能和动态变化。
E花环试验主要用于了解机体细胞免疫功能。广泛应用于肿瘤免疫、移植免疫及免疫性疾病的研究,为某些疾病诊断和防治提供免疫学方面的重要参考。
二、实验原理
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E玫瑰花环实验→判断细胞免疫功能
T
B
T
T淋巴细胞玫瑰花结电镜照片
T淋巴细胞玫瑰
花结示意图
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三、实验仪器、材料和试剂
1、材料
无菌抽取的人静脉血,加入事先有适量肝素液的试管内,混匀抗凝。
健康绵羊红细胞
小牛血清（经56℃30min灭活）。按10：1加入洗过的压积兔红细胞，混匀。于37℃吸收30min，4℃冰箱过夜。然后以2000r/ min离心10min。取上清液经蔡氏滤器过滤后，无菌条件下分装于小瓶。低温保存。
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三、实验仪器、材料和试剂
2、试剂
抗凝剂：1%的肝素钠生理盐水溶液。
%的生理盐水。
Alsver‘s溶液。
Hank溶液。
细胞分层液：上海试剂二厂产品。
%戊二醛溶液：使用前15min用生理盐水或Hank液配制。
染色液：瑞氏或Giemsa染液。
1%醋酸溶液 。
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三、实验仪器、材料和试剂
3、仪器
光学显微镜、离心机、水浴锅、血细胞计数板、50UL微量加样器、医用剪刀及眼科镊子、蔡氏滤器、刻度离心管（10ml）、滴管及吸管、载玻片和盖玻片。
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四、方法与步骤

依无菌手续从从绵羊颈静脉取血，放置4倍体积的Alsver’s 液中，摇匀（放置4℃冰箱保存，限7～10天内用）。
临用前用Hank液洗涤3次，每次1000r，离心5min。取压积的绵羊红细胞用Hank液配成1% 的细胞悬液（ 约2×107 个/ml）
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四、方法与步骤
洗涤后悬浮的红血球
红血球在血球计数板上的密度
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密度梯度离心分离纯化淋巴细胞示意图
四、方法与步骤

取1支洁净、干燥的离心管加入人抗凝血1ml，再加入1mlHanks液稀释血液；
取1支洁净、干燥的离心管，加入1ml细胞分层液；
用吸管吸取上述稀释血液，沿离心管管壁加于细胞分层液的表面（不能冲乱液面）。以3000r/min离心20min，可出现分层，详见图。
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