革兰氏染色的机理和步骤.doc

1. 革兰氏染色的机理和步骤机理: G+ 、 G- 主要由其 CW 化学成分的差异而引起对乙醇的通透性, 抗脱色能力的差异。主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。 G+ 的 CW: 肽聚糖层厚,脂质含量低。乙醇脱色时 CW 脱水,孔径减少,透性降低,不易脱色,呈初染得蓝紫色。 G-的 CW : 肽聚糖层薄, 脂质含量高。乙醇脱色时, 类脂被乙醇溶解, 透性升高,细胞被复染显红色。步骤:①涂片: 在干净的载玻片上滴一滴水, 用接种环挑取菌体均匀涂布于水中。②固定:将玻片靠近酒精灯火焰,蒸干水分,但不要烤焦。③初染:用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。④媒染: 以碘液媒染 1min ,水洗,吸干水分。( 细胞内形成结晶紫与碘的复合物,增强相互作用) ⑤脱色( 关键步骤):以 95% 的乙醇脱色 30s , 应适当振荡均匀, 是乙醇脱色完全。⑥水洗,吸干。⑦复染: ??( 第 2 张)复染 30s ,水洗吸干。⑧干燥镜检。 2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差,以及皮层的离子强度很高, 这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核心中水分, 其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水, 正是这种失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。 3、引起微生物培养过程中 PH 变化的几种可能反应,并说明如何能够维持微培 PH 稳定。答: 培养过程中, 由于营养物质被分解利用, 代谢产物的形成与积累, 会导致 PH 变化。(第 2 张中的图) 还与培养基的 C/N 比有关, C/N 高,经培养基后 PH 显著下降, C/N 低,经培养基后 PH 明显上升。 PH 调节:①加入缓冲剂-------- 常用: 一氢二氢磷酸盐, K 2 HPO 4 呈碱性, KH 2 PO 4 酸性,只在一定的 PH 范围内调节( -- ) ②大量产酸的菌株,加 CaCO 3 调节, CaCO 3 难溶于水,不会使培养液的 PH 过度增加,但可不断中和微生物产的酸。③培养液中存在天然的缓冲系统,如 AA ,肽, Pr 均属***电解质, 也起缓冲的作用。④过酸:治标------ 加 NaOH 、 Na 2 CO 3 中和,治本----- 加适量氮源: NaNO3 、 Pr、 NH3 · H2O ;增加通风量。⑤过碱: 治标-----H2SO4 、 HCl 中和, 治本---- 加适量碳源:G类, 脂类; 减小通风量。 3、抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株? 抗生素法(青霉素法) :适用于细菌。原理:青霉素抑制肽聚糖链间的交联, 组织了合成完整的 CW , 野生型 B 处于正常生长繁殖, 所以对青霉素敏感,可被抑制或杀死;营缺 B 在基本培养基上休眠状态存活下来, 从而达到浓缩营缺型目的。制霉菌素法适用于真菌, 其可与 cm 上?(第 1 张)醇作用,引起 cm 损伤,因为它只能杀死生长繁殖着的真菌,所以...... 菌丝过滤法: 基本培上,野生型霉菌, ?菌的孢子能萌发并长成菌丝, 而缺型孢子一般不萌发,或不能长成菌丝,因此培养一段时间后,用灭菌脱脂棉或滤纸滤去菌丝, 收集滤液, 重复数遍后可除去大部分野生型,从而…… 4 、生产蛋白酶的枯草芽孢杆菌发生遗传变异,使得产量性状下降, 你如何解决?写出具体实验方案。答: 将一定量的枯草芽孢杆菌培养液, 做一定浓度的稀释, 涂布在含有酪素蛋白质的基本培养基上, 37° C 培养一段时间后, 取出培养基, 观察单菌落形成的透明圈大小, 取透明圈直径与菌落直径之比较大的菌落, 挑取培养做进一步的鉴定, 即可得到高产蛋白酶的枯草芽孢杆菌。 5 、以磺***为例,说明化学治疗机的作用机制。答: 机理: 磺***是叶酸组成部分对氨基苯甲酸的结构类似物,( 磺***类药物取代对氨基苯甲酸, 干扰叶酸的合成, 抑制了转***反应, 导致代谢紊乱, 从而抑制 B 生长), 磺***的抑菌作用是因为许多细菌需要自己合成叶酸而生长, 磺***对人体细胞无毒性, 因为人体缺乏从对氨基苯甲酸合成叶酸的相关酶----- 二氢叶酸合成酶, 不能用外界提供的对氨基苯甲酸自行合成叶酸, 而必须直接利用叶酸为生长因子进行生长。( 磺***类---- 与正常代谢产物竞争酶的活性中心, 干扰了酶的功能, 从而干扰代谢的正常进行)。 6、画出生长曲线。(第 1 张) 1、微生物的共性?哪个最基本? 答:①体积小, 面积大( 最基本)②吸收多, 转化快③生长旺, 繁殖快思适应性强,易变异⑤分布广,种类多。 2、比较 G+ , G-B在 CW 结构, 组成, 对溶菌酶, 青霉素的敏感性 4 方面的异同点。结构成分对溶菌酶青霉素 G+ 单层, 组分简单,厚肽聚糖( 90% )磷壁酸( 10% ) 敏感生长期的 G+ 对其敏感 G-