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植物组织培养实验报告
摘要：以大豆子叶为外植体，在 MS培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激
素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响， 并练****无菌
操作。实验结果显示第 2 组即 MS+6-BA（ )+NAA() 和第 3 组即
MS+KT（)+2,4-D() 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈
伤组织诱导组合。
关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织
材料与方法
实验材料：大豆子叶
实验试剂与仪器
（ 1）试剂： 75%酒精、 MS干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂（ NAA、 2， 4-D、
KT、6-BA）、无菌水、升***、 NaOH溶液
2）仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。
实验方法
培养基的配制与灭菌
配制培养基的准备阶段
1）准备 80 个培养试管及封口膜， 2 个小培养皿、 1 个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每个培养试管、 润洗一下。带晾干后将试管编号 1-80 ；
（ 2）在称量纸上用百分之一天平分别称取 琼脂 4 份， 蔗糖 4 份，在
烧杯里用千分之一天平上称取 MS 干粉 4 份（烧杯不要清洗）；
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（ 3）剪小圆纸片 40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片
10，均分在两个大培养皿中。然后分别用报纸包好。
（ 4）把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。
配制培养基
1）在装有 MS干粉的烧杯中按下表加入植物生长调节剂实验所用的所有激素浓度均为
激素的加样量 (ml)
编号
培养基配置
6-BA
NAA KT
2,4-D
1
MS+6-BA（ )+NAA()

2
MS+6-BA（ )+NAA()

3
MS+KT（)+2,4-D()


4
MS+KT（)+2,4-D()


（ 2） 用量筒量取 250ml（稍多）蒸馏水，取一个不锈钢杯子加入 150ml 蒸馏水
和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾 2min，再加入混合好的 MS培养基 1 号和蔗
糖，混合沸腾 2min，用剩余的蒸馏水定容至 250ml；
3）当温度降到 60℃左右时， 将溶液 pH 调至 ，一般加 4 滴 NaOH溶液即可；
4）取编号 1-20 的培养试管，用大量注射器以每瓶 左右培养基分装在培养试管中，用封口膜封口， 4 支一捆捆扎好。
5）用相同的方法配置 2-4 号培养基，并分装、捆扎。
高压湿热灭菌
（ 1）将包好的接种工具，包好的培养皿，以及分装好的试管一起放到高温灭菌
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锅中用二次排气法在 121℃灭菌 20min。
（ 2）高压灭菌锅操作
先关闭高压灭菌锅放气阀 , 待锅压强升到 时, 打开放气阀排出空
气 , 当压力表指针为 0MPa时关闭放气阀。继续加热 , 当压力表再次升到
时 , 再一次排除灭菌锅的空气 , 使压力表指针再次降为 0MPa，关闭放气阀。继续加热 , 让锅的压力上升到一个大气压（ ），此时锅温度为 ℃时，控制热源，维持压力。 20min 后，灭菌结束，待高压锅压力表指针恢复到零后，开启压力锅。
接种
实验前准备工作
1） 取 50 粒左右大豆子叶，分成单瓣，在洗衣粉水中仔细清洗，再用流水冲洗，备用；
2） 接种前，用甲醛 +高锰酸钾熏蒸接种室和培养室（或用臭氧发生器处理） ，将培养基及接种工具放入超净工作台台面，打开鼓风机，打开紫外灯；
3）洗净双手， 用 75%酒精擦拭双手， 并用 75%的酒精擦拭超