实验十二转氨作用(精).doc

实验十二转氨作用(精).doc实验十二转氨作用(精)
实验十二转氨作用(精)
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实验十二转氨作用(精)
实验十二 转氨作用
【实验目的】
1．经过实验掌握水平方向滤纸层析原理和技术
2．认识转氨作用过程。
【实验原理】
转氨基作用是由转氨酶 （氨基转移酶） 催化的， 在这个反响中， α - 氨基酸的氨基与 α - ***酸的***基之间互换， α- 氨基酸转变为相应的 α - ***酸，α - ***酸变为新的一种 α - 氨基酸。
转氨基作用是一种可逆反响。 每个转氨基反响均由专一的转氨酶所催化， 在不一样的生物有机体中均有转氨酶散布。
本实验是将丙氨酸和 α - ***戊二酸与肝匀浆一起水浴反响，肝中的丙氨酸氨基转移酶
ALT，又称谷丙转氨酶 GPT）含量丰富，该酶可将丙氨酸的氨基转移给 α - ***戊二酸，产生***酸和谷氨酸。 利用圆盘纸层析判定谷氨酸的存在， 并且考证组织中的转氨作用。 在肝脏谷丙转氨酶 (GPT) 催化的转氨基作用，反响方程式以下：
COOH
COOH
CH2
CH2
CH2
CH3
CH
2
CH 3
谷丙转氨酶
CH NH2
C O +
CH
NH2 +
C O
COOH
COOH
COOH
COOH
α‐***戊二酸
丙氨酸
谷氨酸
***酸
【实验资料】
1． 实验器械
培育皿；表面皿；滤纸；匀浆器；试管；试管架；恒温水浴锅；毛细管；移液管；喷雾器；剪刀；铅笔；格尺。
2． 实验试剂
⑴ 磷酸缓冲液： 81ml , 2P04 溶液 19ml 混匀，蒸
馏水稀释 20 倍。
⑵ 丙氨酸溶液：称取丙氨酸 克先溶于少许 磷酸缓冲液中，以
1MNa0H认真调理至 后，用磷酸盐缓冲液加至 100ml。
⑶ ａ - ***戊二酸溶液： 称取ａ - ***戊二酸 克先溶于少许 磷酸缓
冲液中，用 1M Na0H认真调理至 后，用磷酸盐缓冲液加至 100ml。
⑷ 谷氨酸溶液：称取谷氨酸 克先溶于少许 0． 磷酸缓冲液中， 以
1MNa0H认真调理至 后，用磷酸缓冲液加至 100ml 。
⑸ ％茚三***溶液：称取茚三*** 克溶于 100ml 95 ％乙醇中。
层析溶剂：水饱和的苯酚。
【实验操作】
1． 肝匀浆的制备：
取新鲜的猪肝 5g, 加入 20m1预冷
磷酸缓冲液，用捣碎机快速成匀浆
(1 万
转大概 30 秒 ) 。两人一组进行以下的实验。
2． 转氨反响：
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实验十二转氨作用(精)
取干燥大试管二支，分别注明测定管与比较管，按下表进行操作：
试剂 (ml) 测定管
肝匀浆